产品中心
PRODUCT CENTER
碘代乙酰基钌荧光磁珠
|
Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
|
|
|
GO101 |
2.5 µm BcMag™ Iodoacetyl-Activated Ruthenium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
|
|
|
GO102 |
2.5 µm BcMag™ Iodoacetyl-Activated Ruthenium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
|
|
|
GO103 |
5 µm BcMag™ Iodoacetyl-Activated Ruthenium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
|
|
|
GO104 |
5 µm BcMag™ Iodoacetyl-Activated Ruthenium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
|
|
|
|
||||
Fluorescence dye properties
|
Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation(nm) |
Emission(nm) |
Fluorescence lifetime (Ԏ) (µsec) |
Stokes shifts (nm) |
|
Ruthenium (Ru2+) |
Far-Red |
470 |
710 |
354.36 |
175 |
|
产品属性 |
||
|
磁珠大小 |
2.5µm 直径; 或5µm直径 |
|
|
磁珠数量 |
~1.47 x 108 beads/mg (2.5µm) ~ 5 x 107 beads /mg (5µm) |
|
|
稳定性 |
短期保存 (<1 hour): pH 3-11; 长期保存: pH 4-10 温度: 4°C -140°C; 大多数有机溶剂 |
|
|
磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
|
|
磁力类型 |
超顺磁性 |
|
|
状态 |
冻干粉 |
|
|
功能团密度 |
2.5µm Magnetic Beads |
~195 µmole / g of Beads |
|
5µm Magnetic Beads |
~180 µmole / g of Beads |
|
|
储存 |
收到后-20℃保存 |
|
BcMag ™ 碘代乙酰基钌荧光磁珠是在表面连接高密度碘代乙酰基官能团的时间分辨荧光（TRF）磁性微球。本款磁珠结合了预活化的碘代乙酰基团、时间分辨荧光染料和磁力特性的优势，可以进行非常敏感的分析。磁珠的制造采用了纳米级超顺磁性氧化铁和钌金属作为核心，并完全封装在高纯度二氧化硅外壳中，确保不会出现氧化铁和钌金属的溶出问题。
它可以通过与巯基（-SH）反应快速，高效的共价固定蛋白质，多肽和其他配体，用于亲和纯化实验。在碱性生理环境（pH 7.2--9）下，在含有20-30%DMSO或DMF的水性或有机溶剂中，碘代乙酰基活化的载体与巯基反应，产生稳定的硫醚键。这些反应通常在黑暗环境下进行，以防止游离碘的形成，因为游离碘可与酪氨酸，组氨酸和色氨酸残基反应（图1）。亲水表面可确保磁珠的非特异性吸附低，分散性好，便于在各种缓冲液中操作。
通过氨基以外的官能团固定亲和配体，对实验也是非常有帮助的。特别是使用硫醇基团，非常适用于引导特定蛋白质分子上结合位点，或活性中心距离较远的偶联过程。
半胱氨酸经常通过二硫键（-S-S-）在其侧链之间结合，作为蛋白质二级或三级结构的一部分。半胱氨酸的侧链含有巯基（-SH）（Cys，C）。这些基团必须在固定之前转化为巯基。巯基（巯基）可以在蛋白质中天然存在，也可以通过还原二硫化物引入或使用各种硫醇化试剂引入。
尽管传统的荧光显色技术在过去几十年中得到了广泛应用，但它们在适用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激发带较窄，背景信号强。2.斯托克斯位移较小，容易造成自熄现象。3.荧光对环境因素敏感，如金属离子浓度、pH值、温度和溶剂极性。4.荧光强度不足，不能检测单个生物分子。5.荧光间歇性（闪烁）影响分子检测的某些数据处理过程，造成误差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag™ TR-FRET测定方法与传统的FRET（Förster共振能量转移）测定方法不同，它利用时间分辨荧光磁珠（BcMag™ TR-Magnetic Beads）作为荧光供体团。供体和受体可以是两个蛋白质、两个DNA链、抗原、抗体或配体或其它受体。在一定的时间延迟后（通常为50至100秒），当供体和受体分子靠近并以时间分辨方式进行监测时，通过荧光共振能量转移产生信号。在BcMag™ TR-FRET测定方法中，微量的分析物可以通过时间分辨磁珠轻松地从样品中富集，从而提高灵敏度。该测定方法消除了由样品和塑料微孔板引起的所有荧光背景影响，以及直接激发受体所产生的背景影响。因此，BcMag™ TR-FRET测定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，该测定方法不需要清洗步骤。BcMag™ TR-FRET测定方法在高通量筛选的生物分析中具有显著的优势，如测定灵活性、可靠性、提高测定灵敏度、更高的通量和更少的假阳性/假阴性结果。
钌金属络合物是一种有效的时间分辨荧光标记物，具有独特的特性。它在470nm处被激发，发射红色荧光（710nm），具有较长的荧光寿命（354.36 µsec）和较大的斯托克斯位移（175 nm）。利用这些特性，时间分辨荧光检测可以显著降低样品的荧光背景，并提高信噪比，使其比传统荧光染料具有更高一个数量级的检测能力。BcMag™碘代乙酰基钌荧光磁珠是用于TR-FRET分析中的优秀供体材料。
TR-FRE磁珠分析的工作流程如下：
1.将与抗体结合的供体磁珠与细胞裂解液混合，并在连续旋转下孵育足够的时间。在混合过程中，磁珠保持悬浮在样品溶液中，使目标分析物能够与供体磁珠结合。2. 孵育后，使用磁力架将磁珠从样品中收集和分离。3. 添加与目标分析物结合的受体，并在连续旋转下孵育足够的时间。4. 多种微孔板读数仪进行TR-FRET测定。
优势和特点：
1. 本款磁珠具有在一种磁珠上，可以同时表现出双重功能的特点：分离/预浓缩和检测分析物，能够在同一磁珠上快速、简便、稳定和高通量地从复杂生物样品中分析痕量分析物。
2. 超高的灵敏度。检测限值低至10 pg/mL，而典型荧光测定的检测限值为100 pg/mL。
3. 极高的光稳定性和耐光漂白性。所有的镧系螯合物或香豆素分子以及氧化铁完全封闭在磁珠的内部，而不仅仅是在磁珠表面上。这种保护环境可以防止氧化铁和染料溶解到水介质中，使磁珠对溶剂、温度、pH等外部条件的敏感性降低。
4. 高荧光强度。由于单个磁珠含有高浓度的镧系螯合物，并且镧系螯合物本身具有40%到90%的高量子产率，因此磁珠具有超强的荧光强度，可显著提高分析灵敏度，而无需信号放大。这种高亮度的磁珠也是时间分辨FRET分析的完美供体。
5. 镧系螯合物或香豆素具有较大的斯托克斯位移（>250nm）、较窄的发射带（-10nm带宽）和较长的荧光寿命（μs），这大大降低了背景影响并提高了信号和干扰信号的比例。
6. 大多数生物检测过程的ELISA测定可以转化为HTRF测定。
7. 测定过程中无需清洗步骤。
8. 磁珠具有亲水性二氧化硅表面，通过具有不同长度连接剂的不同功能基团进行接合，可高效地结合多种配体，如多肽、蛋白质、抗体、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，荧光磁珠非常适合于高通量自动化。
