产品中心
PRODUCT CENTER
超高亮度蛋白L铕荧光磁珠：克服传统荧光团的局限性
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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HP101 |
2.5 µm BcMag™ Protein L Europium Fluorescence Magnetic Beads |
0.5 ml |
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HP102 |
2.5 µm BcMag™ Protein L Europium Fluorescence Magnetic Beads |
1.5 ml |
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HP103 |
5 µm BcMag™ Protein L Europium Fluorescence Magnetic Beads |
0.5 ml |
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HP104 |
5 µm BcMag™ Protein L Europium Fluorescence Magnetic Beads |
1.5 ml |
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Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation (nm) |
Emission (nm) |
Fluorescence lifetime (Ԏ) (µsec) |
Stokes shifts (nm) |
Selection of Emission Filter |
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Europium ion (Eu3+) |
Red |
340 |
615 |
730 |
275 |
620/40 |
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产品属性 |
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磁珠大小 |
2.5µm 直径; 或5µm直径 |
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磁珠数量 |
~10 x 107 beads/mg (2.5µm), ~5 x 107 beads /mg (5µm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁力类型 |
超顺磁性 |
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浓度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4) |
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结合能力 |
~ 350 µg IgG/ml of Beads |
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储存 |
室温运输，储存在4℃，不可冷冻。 |
BcMag™蛋白L铕荧光磁珠是一种具有时间分辨荧光（TRF）性质，表面共价结合了蛋白L图1）的磁性微球。本磁珠将抗体结合蛋白、时间分辨荧光染料和磁力特性的优势结合在一起，可以进行非常敏感的分析。磁珠的制造采用了纳米级超顺磁性氧化铁和铕金属作为核心，并完全封装在高纯度二氧化硅外壳中，确保不会出现氧化铁和铕金属的溶出问题。
尽管传统的荧光显色技术在过去几十年中得到了广泛应用，但它们在适用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激发带较窄，背景信号强。2.斯托克斯位移较小，容易造成自熄现象。3.荧光对环境因素敏感，如金属离子浓度、pH值、温度和溶剂极性。4.荧光强度不足，不能检测单个生物分子。5.荧光间歇性（闪烁）影响分子检测的某些数据处理过程，造成误差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag™ TR-FRET测定方法与传统的FRET（Förster共振能量转移）测定方法不同，它利用时间分辨荧光磁珠（BcMag™ TR-Magnetic Beads）作为荧光供体团。供体和受体可以是两个蛋白质、两个DNA链、抗原、抗体或配体或其它受体。在一定的时间延迟后（通常为50至100秒），当供体和受体分子靠近并以时间分辨方式进行监测时，通过荧光共振能量转移产生信号。在BcMag™ TR-FRET测定方法中，微量的分析物可以通过时间分辨磁珠轻松地从样品中富集，从而提高灵敏度。该测定方法消除了由样品和塑料微孔板引起的所有荧光背景影响，以及直接激发受体所产生的背景影响。因此，BcMag™ TR-FRET测定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，该测定方法不需要清洗步骤。BcMag™ TR-FRET测定方法在高通量筛选的生物分析中具有显著的优势，如测定灵活性、可靠性、提高测定灵敏度、更高的通量和更少的假阳性/假阴性结果。
由于其独特的特性，铕荧光团是一种高效的时间分辨荧光标记。它在340nm处激发，发出615nm的红色荧光，具有长荧光寿命（730微秒）和较大的斯托克斯位移（275nm）。利用这些特性，时间分辨荧光检测可以显著降低样品的荧光背景，并提高信噪比，使其比传统荧光染料具有更高一个数量级的检测能力。BcMag™ 蛋白L荧光磁珠是TR-FRET测定中优秀的供体材料。
TR-FRET磁珠测定方法的工作流程（图2）
1.将与抗体结合的供体磁珠与细胞裂解液混合，并在连续旋转下孵育足够的时间。在混合过程中，磁珠保持悬浮在样品溶液中，使目标分析物能够与供体磁珠结合。2. 孵育后，使用磁力架将磁珠从样品中收集和分离。3. 添加与目标分析物结合的受体，并在连续旋转下孵育足够的时间。4. 多种微孔板读数仪进行TR-FRET测定。
优势和特点：
1. 本款磁珠具有在一种磁珠上，可以同时表现出双重功能的特点：分离/预浓缩和检测分析物，能够在同一磁珠上快速、简便、稳定和高通量地从复杂生物样品中分析痕量分析物。
2. 超高的灵敏度。检测限值低至10 pg/mL，而典型荧光测定的检测限值为100 pg/mL。
3. 极高的光稳定性和耐光漂白性。所有的镧系螯合物或香豆素分子以及氧化铁完全封闭在磁珠的内部，而不仅仅是在磁珠表面上。这种保护环境可以防止氧化铁和染料溶解到水介质中，使磁珠对溶剂、温度、pH等外部条件的敏感性降低。
4. 高荧光强度。由于单个磁珠含有高浓度的镧系螯合物，并且镧系螯合物本身具有40%到90%的高量子产率，因此磁珠具有超强的荧光强度，可显著提高分析灵敏度，而无需信号放大。这种高亮度的磁珠也是时间分辨FRET分析的完美供体。
5. 镧系螯合物或香豆素具有较大的斯托克斯位移（>250nm）、较窄的发射带（-10nm带宽）和较长的荧光寿命（μs），这大大降低了背景影响并提高了信号和干扰信号的比例。
6. 大多数生物检测过程的ELISA测定可以转化为HTRF测定。
7. 测定过程中无需清洗步骤。
8. 磁珠具有亲水性二氧化硅表面，通过具有不同长度连接剂的不同功能基团进行接合，可高效地结合多种配体，如多肽、蛋白质、抗体、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，荧光磁珠非常适合于高通量自动化。
