产品中心
PRODUCT CENTER
快速白蛋白清除试剂盒
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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BE101 |
BcMag™快速白蛋白清除试剂盒 |
25x次 |
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BE102 |
BcMag™快速白蛋白清除试剂盒 |
100x 次 |
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产品特性 |
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组成 |
表面连接有专有化学基团的，改性的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁力类型 |
超顺磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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浓度 |
30 mg/ml (超纯水 ) |
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结合能力 |
10µl serum /20µl of Beads |
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储存条件 |
收到后，4°C保存 |
简介
人类血清或血浆包含丰富的蛋白质组学信息，这些蛋白质经常被用于分析机体是正常或病理状态的蛋白质生物标记物。人类血清中所含有的大量的，种类众多的蛋白质是血液蛋白质研究中最具挑战性的障碍之一。大量表达的蛋白质，如白蛋白和IgG，占血清/血浆总蛋白质的70%。而蛋白质生物标记物的含量则要低得多（pg/ml）。高丰度蛋白质会隐藏需要研究的低丰度蛋白质，对一维和二维电泳、高效液相色谱和质谱分析等分析实验造成影响。高丰度蛋白质必须有效、可重复并明确地从血液样本中去除掉，才可以正确的检测低丰度蛋白质。因此，在进行蛋白质组分析之前，特别是使用质谱法时，有必要从人体样品（如血浆、血清、尿液或脑脊液）中选择性去除白蛋白。
虽然亲合染料配体Cibacron Blue F3GA可以共价结合到商用载体上，用于从水溶液和人血浆中吸附HSA，但它的选择性结合能力较差。在免疫亲和系统中，也使用抗白蛋白抗体对HSA进行结合。这些技术通常具有较好的特异性，但成本高昂。此外，由于这些方法中有许多是基于琼脂糖树脂或其衍生结合柱进行实验，因此，它们富集含量较低的蛋白质的过程非常耗时，无法在短时间内处理大量样品，并且难以适应自动化系统。同时，根据实验要求，有时需要增加样品体积来进行实验研究，这就需要额外的蛋白质浓缩步骤。这就需要具有提高效率、均匀性和吞吐量的新白蛋白去除方法来解决上述问题。
BcMag™ Quick Albumin Removal Kit是基于我们独特的磁珠，经过我们专有的化学修饰，可快速简便地从血清和血浆样品中去除白蛋白。在特定缓冲液条件下，磁珠与样品中的所有其他蛋白质（白蛋白除外）结合，并可以通过结合和释放除白蛋白以外的所有含量较低的蛋白质，达到去除白蛋白目的。 富集和洗脱下来的蛋白质可用于下游应用，如蛋白质组分析、生物标志物检测、酶分析、SELDI分析、蛋白质阵列像素化、1维和2维凝胶电泳、LC/MS和MALDI-TOF MS。
工作流程（图1）
如图1所示，白蛋白清除试剂盒的操作流程非常简单。将磁珠与血清或血浆样品混合，并连续旋转培养。在混合期间，磁珠保持悬浮在样品溶液中，这样就使样品中的所有其他蛋白质（白蛋白除外）可以充分结合到磁珠上。孵育后，收集磁珠，使用磁力分离器从样品中将磁珠分离出来。然后洗脱结合的蛋白质。
特点和优势
l 快速、简单、无需纯化柱、离心机或过滤器。
l 去除95%以上的白蛋白
l 高通量：在30分钟内快速处理多达96个样品
l 低丰度蛋白富集效果相当于或者优于 hexapeptides 或者 antibodies
l 温和的洗脱条件保留了蛋白的三级结构，并允许轻松的转移到二级结构分析。
l 可根据需求调整试验样品体积大小，便与自动化操作。
l 最小的样品稀释程度
l 适用于LC-MS、基于活性的蛋白质分析和蛋白质组学研究。
操作协议
提示：
· 以下协议仅是一个示例。血清中的蛋白质浓度可能不同。10ul人血清含有约700µg的完整蛋白质。这些蛋白中，约70%为人血清白蛋白。每个实验中使用的血清量应由用户优化。系统过载可能导致白蛋白被携带到低丰度蛋白质组分中。使用给定的方案，用户在试验时可清除掉50-100g血清蛋白。
· 样品在含盐缓冲液中洗脱，可能需要在电泳或质谱分析之前进行脱盐。但是，如果样品在分析前已经充分稀释，则可能不需要脱盐。
材料要求
l BcMag™ Quick Albumin Removal magnetic beads
l 1x Binding/Washing Buffer: 20 mM 磷酸钠, pH 6.5,
l 1x Elution Buffer: 100 mM glycine-HCl, pH 2.7
仪器要求
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Item |
Source |
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磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
l BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分离器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可调单通道和多通道移液器 |
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摆斗离心机 |
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如果使用96孔PCR板/管，则需要添加项目 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf™ MixMate™ |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24 × 1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 离心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，确保PCR管或PCR板锥形部分底部的井径必须≥2.5毫米。 |
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操作过程
提示
l 用力震荡试剂瓶，直到磁珠变得均匀。
l 在分液前，不要让磁珠静置超过5分钟。
1. 将25µl磁珠转移到新试管或新的96孔PCR板、微孔板或0.2ml PCR管中，并将65µl的 binding buffer添加到反应管中，使最终反应体积为90μl。
2. 添加10µl血清样品，通过缓慢上下移液20-25次将样品与磁珠混合，或以2000 rpm旋转样品5min（见图）。
3. 将反应的反应板/试管放在磁力分离器上30s或直到溶液澄清。
4. 将反应管保留在磁力分离器上的同时，去掉上清液。
5. 用100μL的binding buffer清洗磁珠，通过缓慢上下移液20-25次，或以2000 rpm旋转样品2分钟的方式。将反应的反应板/试管放在磁力分离器上30s或直到溶液澄清。
6. 重复步骤5一次
7. 将磁珠重新悬浮在50-100µl的Elution Buffer中，通过缓慢上下移液20-25次将样品与磁珠混合，或以2000 rpm旋转样品5分钟。
8. 将上清液转移到新的微量离心管或微量滴定板中。含有目标蛋白的上清液即可用于下游应用。
