产品中心
PRODUCT CENTER
分泌型His-标签蛋白纯化试剂盒
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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MHP101 |
BcMag™ IDA-Ni His-标签蛋白纯化试剂盒 |
5 ml |
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MHP102 |
BcMag™ IDA-Ni His-标签蛋白纯化试剂盒 |
10 ml |
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产品属性 |
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组成 |
表面连接有 Ni2+的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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稳定性 |
适用于pH 4-11,100%乙醇，100%甲醇，8M尿素，6M盐酸胍， 20 mM DTT, 20mM EDTA |
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浓度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O or 1% CoCl26H2O) |
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结合能力 |
>2mg His-标签 GFP /ml 磁珠 |
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储存 |
储存在 4°C |
运输条件: 常温运输
储存条件: 在4ºC储存试剂盒.
简介
BcMag™ 分泌型His标签蛋白质纯化试剂盒是基于磁珠和一种独特的、专有的负载镍离子的配体合成的一个试剂盒。磁珠上配体的结合非常牢固，而且对His标签蛋白质具有极高亲和力，即使在含有化学添加剂如螯合剂（EDTA）、强还原剂（DTT）或细胞培养上清液的组分的情况下也不会出现金属离子浸出现象，尽管，这些化学添加剂具有剥离Ni离子并降低大多数IMAC磁珠作用的功能。His签蛋白质纯化磁珠可以直接从可溶性细胞内蛋白质提取物、HeLa、CHO哺乳动物细胞或Sf9昆虫细胞培养上清液中有效纯化His标签重组蛋白质。它们可以配合手动与磁性分离器使用，也可以与自动化仪器配合使用。它避免了大量耗时的样品预处理过程，例如通过透析和浓缩操作进行缓冲液交换。
磁珠产品与传统色谱法如纯化柱、琼脂糖或非磁性树脂相比具有显著优势。基于磁珠的特性可以在约20分钟内快速高产率处理96个样品，重组蛋白可达到85%以上的纯度。当使用基于色谱柱的技术实验时，在科学研究实验室处理多个样品时，可能需要大量的手动移液操作。这种移液操作会造成实验和人之间目标生物分子产量的差异。实验人员和学生可能需要大量的培训和实践才能产生恒定的蛋白质产量。而且磁珠具有许多优点，例如它们易于使用，快速的实验方案，适用性以及高通量自动化和小型化处理的便利性等。
操作流程
用磁性微粒进行蛋白纯化的操作过程非常简单（图1）。只需要将磁性微粒与细胞裂解物混合，并连续旋转培养足够时间。在混合过程中，保持磁珠悬浮在样品溶液中，使目标蛋白质与被固定的配体充分结合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分离器将磁珠从样品中分离。然后，用过含咪唑的洗脱缓冲液洗脱下纯化后的His标签的重组蛋白。
优势及特点
l 磁珠表现出比多孔载体更少的非特异性结合率。
l 稳定的共价键，最少的配体泄漏
l 在含有高达20mM EDTA和20mM还原试剂的情况下，磁珠不会发生镍离子浸出现象。
l 与细胞培养基中过量表达、或分泌蛋白的纯化兼容。
l 极高的蛋白纯度
l 性价比高：无需使用纯化柱、过滤器、有机试剂或进行重复移液。
l 高通量：与许多不同的自动化液体处理系统兼容。
产品应用
l 研究蛋白质结构和功能
l X射线晶体学的重组蛋白的制备
l 是研究蛋白质，与蛋白质或DNA相互作用的理想选择材料
l 在免疫研究中，提高抗体与对应蛋白的结合和能力
l 即使使用粗细胞裂解液，也能有效筛选出表达的蛋白质
l GST标签蛋白的微量纯化
背景信息
多聚组氨酸标签，也称为6xHis标签，和His标签，是从各种表达系统（包括细菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞系统）中纯化重组蛋白的通用工具。该标签是位于重组蛋白的N或C末端的包含六个或更多个连续组氨酸的残基。由于这个氨基酸链体积非常小，His标签具有几个独特的特性，包括较少的免疫原性、亲水性以及可在天然和变性条件下都可发挥作用的用途广泛性。此外，不需要从重组蛋白上切割标签，因为它不会干扰其融合蛋白的结构和功能。His标签的纯化原理基于固定化金属离子亲和层析（IMAC）。
固定化金属离子亲和层析（IMAC）是一种快速的亲和纯化层析技术，是基于携带his标签的重组蛋白质对Ni2+或Co2+的亲和力从而达到分离目的，而Ni2+或Co2+则被结合固定到固相基质表面，例如珠状琼脂糖或纯化柱。在pH 7-8时，His标签蛋白将与Ni2+或Co2+结合。His标签重组蛋白质的结合反应受到各种自变量的影响，如pH、温度、盐类型、盐浓度、固定化的金属和配体密度以及蛋白质大小。可通过降低pH梯度、增加咪唑浓度或在缓冲液中加入EDTA螯合剂来洗脱结合的蛋白质。该技术是快速、直接捕获和纯化带标签重组蛋白的，高性价比的理想工具。
尽管IMAC是一种非常有效的蛋白质纯化技术，但这种技术主要用于传统的亲和层析基质，如琼脂糖树脂或纯化柱。使用这些固体基质进行纯化过程非常繁琐、耗时，无法处理体积非常微小的样品，并且难以适应自动化系统。因此，我们研发出了一种非常有效的磁珠IMAC分离产品来克服这些限制。
相关文献
1.Carlsson M, Granér T, Algotsson M, Andersson LC, Björner M, Glad G, Hörnsten L, Le Greves P, Lindgren H, Lindqvist S, Öberg K, Hedlund H. New IMAC Media Enabling Purification of Histidine-tagged Proteins Directly From Eukaryotic Cell Culture Supernatants. J Biomol Tech. 2013 May;24(Suppl):S66.
2.Spriestersbach A, Kubicek J, Schäfer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15.
3.Zhang C, Fredericks D, Longford D, Campi E, Sawford T, Hearn MT. Changed loading conditions and lysate composition improve the purity of tagged recombinant proteins with tacn-based IMAC adsorbents. Biotechnol J. 2015 Mar;10(3):480-9.
4.Pina AS, et al. (2014) Affinity tags in protein purification and peptide enrichment: An overview. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) 1129: 147-168.
5.Young CL, et al. (2012) Recombinant protein expression and purification: A comprehensive review of affinity tags and microbial applications. Biotechnol J 7(5): 620-634.
