产品中心
PRODUCT CENTER
IDA-His-标签蛋白纯化试剂盒
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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MHN101 |
BcMag™ IDA-Ni His-标签蛋白纯化试剂盒 |
5 ml |
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MHN102 |
BcMag™ IDA-Ni His-标签蛋白纯化试剂盒 |
10 ml |
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MHN103 |
BcMag™ IDA-Ni His-标签蛋白纯化试剂盒 |
50 ml |
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MHO101 |
BcMag™ IDA-Co His-标签蛋白纯化试剂盒 |
5 ml |
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MHO102 |
BcMag™ IDA-Co His-标签蛋白纯化试剂盒 |
10 ml |
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MHO103 |
BcMag™ IDA-Co His-标签蛋白纯化试剂盒 |
50 ml |
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产品属性 |
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组成 |
表面连接有 Ni2+ 或者 Co2+磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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浓度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O or 1% CoCl26H2O) |
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结合能力 |
>2mg His-标签 GFP /ml 磁珠 |
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储存 |
储存在 4°C |
运输条件: 常温运输
储存条件: 在4ºC储存试剂盒.
简介
BcMag™ IDA 磁珠是直径为5µm，高度均匀的，表面共价连接有高密度IDA（亚氨基二乙酸酯）基团的IMAC磁性微球。它被设计用于从各种类型生物样品中捕获和纯化带有组氨酸标签的重组蛋白质。该微球结合了IMAC蛋白纯化的所有优点（（成本低、操作简单、高特异性和大容量）和磁性，在使用手动操作或自动化快速高通量纯化操作过程都适用。Bioclone公司生产出两种带不同离子的IDA磁珠用于His-tag蛋白纯化；BcMag™ IDA-Ni2+磁珠和BcMag™ IDA-Co2+磁珠。目前，最常用的蛋白纯化金属离子是镍离子（Ni2+）用于His标签融合蛋白的纯化，因为它具有极高的结合量，而钴离子（Co2+）可以提供纯化蛋白更高的纯度，但蛋白结合量较低。
Workflow
用磁性微粒进行蛋白纯化的操作过程非常简单（图1）。只需要将磁性微粒与细胞裂解物混合，并连续旋转培养足够时间。在混合过程中，保持磁珠悬浮在样品溶液中，使目标蛋白质与被固定的配体充分结合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分离器将磁珠从样品中分离。然后，用过含咪唑的洗脱缓冲液洗脱下纯化后的His标签的重组蛋白。
优势及特点
l 快捷，简单的一步法高通量操作;无需纯化柱或过滤器，或重复移液、离心等操作。
l 稳定的共价键，最少的配体泄漏
l 极高结合能力，非常低的非特异性结合率
l 可根据实验条件对样品体积进行调整，便于自动化操作
l 产品重复效果好
产品应用
l 研究蛋白质结构和功能
l X射线晶体学的重组蛋白的制备
l 是研究蛋白质，与蛋白质或DNA相互作用的理想选择材料
l 在免疫研究中，提高抗体与对应蛋白的结合和能力
l 即使使用粗细胞裂解液，也能有效筛选出表达的蛋白质
l GST标签蛋白的微量纯化
背景信息
多聚组氨酸标签，也称为6xHis标签，和His标签，是从各种表达系统（包括细菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞系统）中纯化重组蛋白的通用工具。该标签是位于重组蛋白的N或C末端的包含六个或更多个连续组氨酸的残基。由于这个氨基酸链体积非常小，His标签具有几个独特的特性，包括较少的免疫原性、亲水性以及可在天然和变性条件下都可发挥作用的用途广泛性。此外，不需要从重组蛋白上切割标签，因为它不会干扰其融合蛋白的结构和功能。His标签的纯化原理基于固定化金属离子亲和层析（IMAC）。
固定化金属离子亲和层析（IMAC）是一种快速的亲和纯化层析技术，是基于携带his标签的重组蛋白质对Ni2+或Co2+的亲和力从而达到分离目的，而Ni2+或Co2+则被结合固定到固相基质表面，例如珠状琼脂糖或纯化柱。在pH 7-8时，His标签蛋白将与Ni2+或Co2+结合。His标签重组蛋白质的结合反应受到各种自变量的影响，如pH、温度、盐类型、盐浓度、固定化的金属和配体密度以及蛋白质大小。可通过降低pH梯度、增加咪唑浓度或在缓冲液中加入EDTA螯合剂来洗脱结合的蛋白质。该技术是快速、直接捕获和纯化带标签重组蛋白的，高性价比的理想工具。
尽管IMAC是一种非常有效的蛋白质纯化技术，但这种技术主要用于传统的亲和层析基质，如琼脂糖树脂或纯化柱。使用这些固体基质进行纯化过程非常繁琐、耗时，无法处理体积非常微小的样品，并且难以适应自动化系统。因此，我们研发出了一种非常有效的磁珠IMAC分离产品来克服这些限制。
相关文献
1. Jansen, J-C. (Editor). (2011). Protein Purification: Principles, High-Resolution Methods, and Applications. 3rd edition. Volume 151 of Methods of Biochemical Analysis. John Wiley & Sons, Hoboken, NJ
2. Bornhorst, J.A. and Falke, J.J. (2000). Purification of Proteins Using Polyhistidine Affinity Tags. Methods Enzymol. 326: 245-254.
3. Spriestersbach A, Kubicek J, Schäfer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15. doi: 10.1016/bs.mie.2014.11.003. Epub 2015 May 4. PMID: 26096499.
4. Zhang C, Fredericks D, Longford D, Campi E, Sawford T, Hearn MT. Changed loading conditions and lysate composition improve the purity of tagged recombinant proteins with tacn-based IMAC adsorbents. Biotechnol J. 2015 Mar;10(3):480-9. doi: 10.1002/biot.201400463. Epub 2014 Oct 31. PMID: 25303209.
5. Pina AS, et al. (2014) Affinity tags in protein purification and peptide enrichment: An overview. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) 1129: 147-168.
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