产品中心
PRODUCT CENTER
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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MG101 |
BcMag™ GST-标签蛋白纯化试剂盒
2 ml BcMag™ Glutathione magnetic beads |
Each |
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MG102 |
BcMag™ GST-标签蛋白纯化磁珠 |
5 ml |
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MG103 |
BcMag™ GST-标签蛋白纯化磁珠 |
10 ml |
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产品属性 |
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组成 |
连接有高密度谷胱甘肽的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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浓度 |
50 mg/ml (1x PBS) |
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结合能力 |
>2mg GST /ml 磁珠 |
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储存 |
储存在 4°C |
运输条件: 常温运输
储存条件: 在4ºC储存试剂盒.
简介
BcMag™ GST-Tagged protein purification magnetic beads是将高密度谷胱甘肽共价连接到磁性微球上。该微球结合了亲和蛋白纯化的所有优点（成本低、操作简单、高特异性和大容量）和磁性，在使用手动操作或自动化快速高通量纯化操作过程都适用。它是专门设计用于从各种类型样品中捕获和纯化GST标记的蛋白质的一款磁珠产品。
工作流程
用磁性微粒进行蛋白纯化的操作过程非常简单（图1）。只需要将磁性微粒与细胞裂解物混合，并连续旋转培养足够时间。在混合过程中，保持磁珠悬浮在样品溶液中，使GST标签的蛋白质与被固定的配体充分结合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分离器将磁珠从样品中分离。然后，用过量的还原型谷胱甘肽洗脱下纯化后的GST标签的重组蛋白。
优势及特点
l 快捷，简单的一步法高通量操作;无需纯化柱或过滤器，或重复移液、离心等操作。
l 稳定的共价键，最少的配体泄漏
l 极高结合能力，非常低的非特异性结合率
l 可根据实验条件对样品体积进行调整，便于自动化操作
l 产品重复效果好
产品应用
l 研究蛋白质结构和功能
l X射线晶体学的重组蛋白的制备
l 是研究蛋白质，与蛋白质或DNA相互作用的理想选择材料
l 在免疫研究中，提高抗体与对应蛋白的结合和能力
l 即使使用粗细胞裂解液，也能有效筛选出表达的蛋白质
l GST标签蛋白的微量纯化
背景信息
谷胱甘肽-S-转移酶（GST）是一种高度可溶和稳定的，26kDa大小的蛋白酶，可以对谷胱甘肽（GSH）的保护机制进行催化作用。许多真核蛋白质在原核表达系统（如大肠杆菌）中表达时，是以包涵体（不溶性聚集蛋白）的形式产生的，包涵体是一种由错误折叠引起的故障蛋白质聚合体。将包涵体蛋白重新折叠成为功能蛋白通常是非常困难的。GST蛋白也因为其本身的高稳定性和高溶解度被广泛用作融合伙伴，用来促进目标蛋白质的更大量表达和溶解。此外，GST蛋白对其天然底物还原型谷胱甘肽还有很高的亲和力。因此，GST作为亲和标签成为原核表达系统中活性重组产物单步纯化的最常用工具。
谷胱甘肽是一种短肽（Glu-Cys-Gly），它对谷胱甘肽-S-转移酶（GST）具有高度亲和力。当将谷胱甘肽固定在色谱基质（如珠状琼脂糖或磁珠）中时，基质可以通过亲和作用精确捕获GST标记的蛋白质。通过将编码目标蛋白质的DNA序列插入到表达载体中，GST标签可以与蛋白质的C末端或N末端融合。如果需要，可以通过位点特异性蛋白酶将感兴趣的蛋白质从GST标签上切割下来。蛋白酶位点可以设计在GST标签和目标蛋白质之间的连接肽链部分。
目前，谷胱甘肽的纯化方式主要是固定在传统的亲和层析基质上，如琼脂糖树脂或纯化柱。使用这些固体基质作为材料进行蛋白纯化，纯化过程非常繁琐、耗时，且无法处理体积非常微小的样品，并且难以适应自动化系统。Bioclone研发了一种高效的基于磁珠的GST标签蛋白质纯化系统来克服这些问题。
General references
· Frangioni, J.V. and Neel, B.G. (1993). Solubilization and purification of enzymatically active glutathione s-transferase (pGEX) fusion proteins. Anal Biochem 210:179-87.
· Simons, P.C. and VanderJagt, D.L. (1977). Purification of glutathione S-transferases for human liver by glutathione-affinity chromatography. Anal Biochem 82:334-41.
