产品中心
PRODUCT CENTER
链酶亲和素磁珠
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MMI 105 |
BcMag™ 链酶亲和素磁珠 |
5ml |
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MMI 106 |
BcMag™ 链酶亲和素磁珠 |
10ml |
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如需大量订购，请联系我们报价！ |
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产品属性 |
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磁珠大小 |
直径~ 2.5 µm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5µm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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浓度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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结合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化单链核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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储存 |
室温运输，4℃储存. 不可冷冻 |
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本款磁珠是一种高度均匀的超顺磁性磁珠，表面链接有高密度、高纯度（>97%）的链霉亲和素。磁珠是以纳米级超顺磁性氧化铁为核心，由高纯度二氧化硅作为外壳包裹，确保氧化铁不会发生浸出问题。这款磁珠经过专门设计和测试，可用于免疫沉淀、细胞分选以及从细胞裂解物或杂交反应中快速捕获目标分子，如DNA、RNA、抗体或蛋白质等。
链霉亲和素（亲素多倍体）和生物素之间表现出的相互作用，是已知的最高非共价相互作用之一。抗生物素、链霉亲和素、单体抗生物素及其类似物已成为探针和亲和配体的有力工具，广泛应用于生化分析、疾病诊断、亲和纯化和药物递送。链霉亲和素是一种四聚体生物素结合蛋白，来源于亲和素链霉菌，分子质量为60000道尔顿。链霉亲和素不含碳水化合物结构，pI值较低，非特异性结合程度较低，使链霉亲和素成为许多检测系统的理想选择试剂。
特点及优势
链霉亲和素-生物素结合系统的优势和益处
l 极高的亲和力：链霉亲和素是同源四聚体，具有较高的生物素结合亲和力，具有KD∼
10−14米。
l 高稳定性：生物素结合复合物具有良好的稳定性，可抵抗极端pH值、温度（2°C和
40°C）、极端的有机溶剂环境、变性剂（如氯化胍）、洗涤剂（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的选择性和特异性：生物素和链霉亲和素的相互作用具有高度的特异性，可极大降
低非特异性结合概率。
l 高灵敏度：高稳定性和特异性确保了极高的检测灵敏度。
l 灵活性：生物素体积小的特点和显著的稳定性被证明非常适用于结合各种分子，例如
合成聚合物、荧光团、与小分子或生物分子中的特定位置结合，从而对共轭生物分子的结构和功能施加最小的干扰。
使用链霉亲和素磁珠的优点和益处
l 快速、简单、一步式的高通量操作过程：不需要离心柱或过滤器，或费时费力的重复移液或离心（图1）
l 极高的结合能力
l 非常低的非特异性结合率
l 可根据需要调整反应体积的大小，适用于自动化操作
操作协议
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分离器（适用于手动操作）：根据实验时生物样品的体积，使用者可以选择一下不同型号的磁力分离器：
BcMag™ separator-2可以容纳两个单独的1.5 ml离心管(Cat.# MS-01);
BcMag™ separator-6可以容纳六个单独的1.5 ml离心管(Cat.# MS-02);
BcMag™ separator-24可以容纳24个单独的1.5-2.0 ml离心管(Cat.# MS-03);
BcMag™ separator-50可以容纳一个单独的50 ml离心管，一个15ml的离心管，以及四个1.5ml离心管(Cat.# MS-04);
BcMag™ separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作过程
提示
l 一下操作过程是一个通用的亲和纯化操作。为了获得最佳结果，每个用户都应该根据所需要纯化的目标蛋白确定最佳工作条件。
l 我们强烈建议用户使用滴定法，根据粗样品中目标生物素化分子的浓度（基于磁珠结合能力），优化每次使用中添加的磁珠数量。使用过多的磁珠会导致过高的背景，而使用磁珠的量过少会导致产量降低。
1. 将最佳添加量的磁珠转移到离心管中。将离心管放在磁力分离器上1-3分钟，当磁珠完全沉淀时，去除上清液。
2. 取下试管，用5倍体积的PBS buffer通过涡漩清洗磁珠30秒。将试管置于室温下1-3分钟。将试管放在磁力分离器上1-3分钟，当磁珠完全沉淀时，去除上清液。
3. 重复步骤2两次。
4. 向含有目标分子的粗样品中加入洗涤过的磁珠，并在室温或所需温度下培养1-2小时（温度越低，培养时间越长）。
提示：强烈建议进行滴定实验以优化培养时间。因为较长时间的孵化可能会导致背景过
高。
5. 用5倍磁珠体积的PBS buffer或1M NaCl彻底清洗珠（可多次清洗），直到洗脱液在280 nm
处吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂可能会降低非特异性背景。例如，向
洗涤缓冲液中添加NaCl（浓度为1-1.5 M）、0.1-0.5%的非离子洗涤剂，如Triton X-
100或吐温20。
问题和解决方案
l 如何打破生物素和链霉亲和素之间的结合？
生物素和链霉亲和素之间的化学键结合力非常强。但它可以在变性条件下断裂。许多应
用不需要从链霉亲和素中分离生物素。但是，如果用户需要将生物素与链霉亲和素分离，请遵循以下建议：
1. 蛋白质或者抗体
为了从磁珠中洗脱结合的生物素化蛋白质或抗体，可向磁珠中添加适量的洗脱缓冲液（0.1 M
甘氨酸HCl，pH 2.5），在室温下培养0.5-5分钟，通过磁力分离器去除磁珠，并将上清液转移到新试管中。通过添加1/10体积的中和缓冲液（1.0 M Tris-HCl，pH 9.0），立即将上清液中和至pH 7.0。
2.DNA
由于洗脱较困难，不推荐使用长链核酸作为生物素化探针进行洗脱。对于短的生物素化
核酸洗脱，用户可以尝试以下方法：
A. 为了从磁珠中洗脱结合的生物素化低聚物，添加适量的洗脱缓冲液（10mM EDTA，
pH 8.2，95%甲酰胺），在65℃下培养2分钟。
B. 通过磁力分离器清除磁珠，并将上清液转移到新试管中。
l 如何从磁珠中洗脱结合的非生物素化样品？
1.蛋白质或者抗体
如果非生物素化的蛋白质或抗体与生物素化的抗体或蛋白质相互作用，则添加适量的洗
脱缓冲液（0.1 M甘氨酸-HCl，pH 2.5），在室温下培养30秒-5分钟，通过磁力分离器去除磁珠，并将上清液转移到新试管中。通过添加1/10体积的中和缓冲液（1.0 M Tris-HCl，pH9.0），立即将上清液中和至pH7.0。
2.DNA或者RNA
生物素化DNA或RNA是一种短寡聚体探针。可通过添加适量d2H2O并在65-70℃下加热3-5分钟来洗脱结合的非生物素化DNA或RNA。通过磁力分离器去除磁珠，并将上清液转移到新试管中。生物素化的DNA或RNA是大片段时，可通过添加适量d2H2O并在95℃下加热3-5分钟来洗脱结合的非生物素化DNA。通过磁力分离器去除磁珠，并将上清液转移到新试管中。
