产品中心
PRODUCT CENTER
DADPA活化磁珠
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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FA105 |
1µm BcMag™DADPA活化磁珠 |
150 mg |
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FA106 |
1µm BcMag™ DADPA活化磁珠 |
300 mg |
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FA107 |
5µm BcMag™ DADPA活化磁珠 |
150 mg |
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FA108 |
5µm BcMag™ DADPA活化磁珠 |
300 mg |
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如需大量订购，请联系我们报价！ |
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产品属性 |
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组成 |
表面连接有DADPA基团的，二氧化硅包覆氧化铁的磁珠 |
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磁珠大小 |
1µm~直径；5µm~直径 |
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磁珠数量 |
• 约1.68 x 109磁珠/毫克（1微米磁珠） • 约5 x 107磁珠子/毫克（5微米磁珠） |
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表面积 |
约100m2/克 |
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稳定性 |
短期（<1小时）：pH 3-11；长期：pH 4-10 温度：4°C-140°C；大多数有机溶剂 |
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磁力大小 |
40-45 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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有效密度 |
2.5克/毫升 |
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浓度 |
20mg/ml（1mM ETDA，pH 7.0） |
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官能团密度 |
1µm磁珠 |
约200摩尔/克珠子 |
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5µm磁珠 |
约180摩尔/克珠子 |
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存储 |
在4°C下保存，收到后避光、防潮 |
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类固醇/药物/染料结合方案
对于缺乏易反应官能团的分子，使用传统方法固定可能很困难。特别是某些药物，类固醇，染料和其他小化学分子通常具有缺乏用于固定的适当反应基团的结构。其他化合物具有低反应性官能团或被空间抑制。然而，其中一些化合物含有活性（或可替代）氢，可以使用曼尼希方法与甲醛和胺缩合。
曼尼希反应诱导的固定化
曼尼希反应被定义为甲醛（或另一种醛）与氨和另一种含有活性氢的分子的缩合。该反应可以用伯胺，仲胺甚至酰胺胺代替氨进行。当在该过程中使用二氨基二丙胺（DADPA）树脂作为伯胺时，发生配体固定化。
类固醇/药物/染料结合方案
BcMag™ 类固醇/药物/染料缀合方案使用DADPA封端的磁珠通过曼尼希反应诱导的固定化有效缀合缺乏易反应性官能团的化合物，例如类固醇，染料和药物。BcMag公司™ DADPA封端的磁珠是均匀的二氧化硅基超顺磁珠，表面涂有高密度的DADPA（二氨基二丙胺）官能团。由于不存在或不可接近易反应的官能团，使用现有方法难以或不可能固定类固醇，染料，药物和其他微小化合物。然而，这些小分子可以通过其在曼尼希反应中与甲醛和胺缩合的活性氢固定在DADPA封端的磁珠上。
特点和优势：
· 高结合能力
· 快速、高效耦合
· 亲水性长臂间隔物最小化空间位阻和非特异性结合。
协议
注意：
• 以下方案是将含胺配体偶联至BcMag的示例™ DADPA封端的磁珠。该协议可以相应地放大和缩小。强烈建议滴定以优化每次应用所需的珠子数量。
• 偶联缓冲液或配体不应含有任何氨基（例如Tris）或甲酰基。
• 由于溶液相聚合，含有配体的偶联效率非常低。
所需材料
• 偶联缓冲液：0.1 M MES，0.15 M NaCl，pH 4.7
• 洗涤缓冲液：0.1 M Tris，pH 8.0
• 偶联剂：37%甲醛
• 磁架（用于手动操作）：根据样品体积，用户可以选择以下磁架之一：BcMag rack-2用于容纳两个单独的1.5 ml离心管（目录号#MS-01）；BcMag rack-6用于容纳六个单独的1.5 ml离心管（目录号#MS-02）；BcMag rack-24用于容纳二十四个单独的1.5-2.0 ml离心管（目录号#MS-03）；BcMag rack-50用于容纳一个50毫升离心管，一个15毫升离心管和四个单独的1.5毫升离心管（目录号#MS-04）；BcMag公司™ rack-96用于固定96 ELISA板或PCR板（目录号#MS-05）。
A. 样品制备
1. 如果可溶，将1-10mg配体溶解在1ml偶联缓冲液中。如果不溶，将其溶解在0.5 ml 100%乙醇中，然后加入0.5 ml偶联缓冲液，制成50%乙醇/缓冲液。（注意：如果使用乙醇进行偶联，则在添加样品之前，必须用50%乙醇洗涤磁珠。）
B、 磁珠制备
1. 摇动瓶子以完全重悬珠子，并将30 mg磁珠转移到离心管中。
2. 将试管放在磁性支架上1-3分钟。在管保持在支架上的同时除去上清液。从支架上取下试管，并通过涡旋将珠子用1 ml偶联缓冲液重悬30秒。
3. 重复步骤2两次。
C. 联轴器
1. 将来自A1和100μl偶联试剂的样品加入洗涤过的磁珠中，充分混合，并在38-60℃下连续旋转孵育>48小时。
注意：用户应凭经验确定最佳偶联反应时间和温度。
2. 如B2所述，用1ml偶联缓冲液洗涤磁珠四次，然后用dH2O洗涤两次。
注意：
如果不溶性配体在50%乙醇中缀合，则珠子应用50%乙醇洗涤三次，dH2O洗涤两次，100%乙醇洗涤两次，最后用dH2O洗涤两次。
3. 将珠子重悬于含有0.05%叠氮化钠的所需缓冲液中，并将其保存在4℃。°
D. 通用亲和纯化方案
1. 将最佳量的珠子转移到离心管中。将试管放在磁性支架上1-3分钟。在管保持在支架上的同时除去上清液。
注意：
· 强烈建议根据粗样品中目标蛋白的量进行滴定，以优化每次应用所使用的珠子数量。使用过多的磁珠会导致较高的背景，而使用过少的磁珠会导致较低的产率。每毫克共轭磁珠通常与1-20µg靶蛋白结合。
2. 取出试管，通过涡旋将珠子用5床珠子体积的PBS缓冲液重悬30秒。将试管在室温下放置1-3分钟。将试管放在磁性支架上1-3分钟。在管保持在支架上的同时除去上清液。
3. 重复步骤2两次
4. 将洗涤过的珠子添加到含有目标蛋白的粗样品中，并在室温或所需温度下孵育1-2小时（较低的温度需要较长的孵育时间）。
5. 用5床珠子体积的PBS缓冲液或1M NaCl充分洗涤珠子，直到280 nm处洗脱的吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
6. 通过适当的方法洗脱靶蛋白，例如低pH（2-4），高pH（10-12），高盐，高温，亲和洗脱或在SDS-PAGE上样缓冲液中煮沸。
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