产品中心
PRODUCT CENTER
单链DNA一步法去除试剂盒：
不费吹灰之力获得最高质量的DNA
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产品名称 |
单位规模 |
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AW101 |
BcMag公司™ 单链DNA一步法去除试剂盒 |
1毫升 |
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AW102 |
BcMag公司™ 单链DNA一步法去除试剂盒 |
3毫升 |
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一步法单链DNA去除试剂盒：不费吹灰之力就能获得最高质量的DNA
这种单链DNA去除试剂盒为从PCR和其他酶促反应中快速去除单链DNA提供了一种高效且经济的方法。
简介
BcMag公司™ 单链DNA去除试剂盒使用与高纯度核酸外切酶I（ExoI）共价缀合的磁性微球从溶液中去除单链DNA。ExoI最初来自大肠杆菌。该酶是一种55 kDa的核酸外切酶，可在3'中逐步水解单链DNA（ssDNA）→5’方向。该核酸外切酶对单链DNA具有高度特异性，不会与双链DNA或RNA以及末端3'-OH基团被磷酰基或乙酰基阻断的DNA链反应。核酸外切酶I耐受多种缓冲条件，通常可以添加到PCR反应中。核酸外切酶I可以通过在80°C下热处理15分钟而失活。由于核酸酶稳定且与磁珠共价固定，用ExoI固定的磁珠可以有效地从反应中去除单链DNA，例如PCR引物，而溶液中不残留核酸酶。
应用程序
• PCR产物的预测序清理
• Megaprimer PCR用于定点突变
• 从核酸混合物中去除含有3’-羟基末端的ssDNA
• 测定具有3'-羟基末端的单链DNA的存在
特点和优势
· 有效的单管和无提取方案（图1）。
· 超快：在不到30分钟的时间内处理96个样品，时间少于10秒
· 因此，在反应结束时回收的核酸酶可以重复使用。
· 容易从反应中分离核酸酶。
· 固定化核酸酶的稳定性增加。
· 成本效益：消除了色谱柱、过滤器、费力的有机试剂和所需的最少塑料制品。
· 高通量：与许多不同的自动化液体处理系统兼容。
工作流
配方：液体（在20 mM Tris-HCl（pH 7.5），0.1 mM EDTA，1 mM DTT和50%（v/v）甘油中提供）
活性：1μl磁珠将在37°C下于30分钟内在67 mM甘氨酸KOH（pH 9.5），6.7 mM MgCl2、1 mM DTT中消化0.5μg寡核苷酸。
反应缓冲液：10倍反应缓冲液670 mM甘氨酸KOH（25°C时pH 9.5），67 mM MgCl2,10 mM DTT。
装运：在环境温度下装运。收到后，将磁性核酸酶珠保存在-20°C。等分试样以避免反复冷冻和解冻
协议
A、 附属设备
磁性机架
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项目 |
来源 |
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离心管磁性支架 **根据样本量，用户可以选择以下磁性机架之一 |
· BcMag机架-2，用于容纳两个单独的1.5 ml离心管（Bioclone，目录号#MS-01） · BcMag机架-6，用于容纳六个单独的1.5 ml离心管（Bioclone，目录号#MS-02） · BcMag Rack-24用于容纳二十四个单独的1.5-2.0 ml离心管（Bioclone，目录号#MS-03） · BcMag Rack-50用于容纳一个50 ml离心管，一个15 ml离心管和四个单独的1.5 ml离心管（Bioclone，Cat。#MS-04） |
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BcMag 96孔板磁架。 |
· BcMag 96孔板磁性支架（侧拉），与96孔PCR板和96孔微孔板或其他兼容支架兼容（Bioclone，目录号：MS-05） |
B、 程序
· 不要使用含有有机溶剂的缓冲液。
· 通常，根据ssDNA的浓度，将珠子以所需的珠子量直接添加到任何标准缓冲液中（1μl磁珠将消化0.5μg寡核苷酸）
1. 摇动瓶子重新悬浮磁珠，直到它完全均匀。
重要！配药前必须混合珠子。配药前，不要让珠子静置超过2分钟。重新悬浮磁珠每2分钟。
2. 在反应中加入适量的磁珠。
3. 通过缓慢上下移液20-25次，将样品与珠子混合1-2分钟，或以2000 rpm的转速涡旋样品2分钟。
4. 在37°C下连续旋转孵育30分钟。
5. 将样品板或样品管放在磁性支架上30秒或直到溶液澄清。
（选项：以3500 rpm离心45秒）
6. 将上清液转移到干净的板/管中，同时样品板保持在磁分离板上。该样本已准备好用于下游应用。
