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PRODUCT CENTER
一步法PCR抑制剂清除试剂盒|快速有效去除PCR抑制剂
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货号 |
产品名称 |
规格 |
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AX101 |
BcMag公司™ 一步PCR抑制剂去除试剂盒 |
1毫升 |
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AX102 |
BcMag公司™ 一步PCR抑制剂去除试剂盒 |
5毫升 |
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这种一步法PCR抑制剂清除试剂盒可快速有效地从DNA样品中去除PCR抑制剂，以确保准确，高质量的PCR结果。该试剂盒使用简单，方便且具有成本效益。
简介
在过去几十年中，经过不断发展，PCR技术已经成为最有效的分子生物学实用工具之一。然而，从不同生物样本中提取出的DNA模版，通常都回含有各种各样的PCR抑制剂，这些抑制剂会干扰PCR的正常扩增。 PCR抑制剂是一些能抑制聚合酶链式反应（PCR）正常DNA扩增的化合物。PCR抑制剂通常会通过与DNA聚合酶的活性位点直接结合，来影响其发挥其作用，从而导致DNA扩增的敏感性降低或完全失败。因此，在PCR扩增之前从DNA模版中去除PCR抑制剂对于所有下游应用至关重要。
PCR抑制剂起源于哪里？
PCR抑制剂存在于各种生物材料（器官、血液、体液等）、环境样品（水、土壤、空气等）和食物（肉、奶、水果、蔬菜、海鲜等）中。此外，在运输、样品处理（例如预浓缩过程）或核酸提取过程中可能会意外添加抑制物质。PCR抑制剂可以来自原始样品本身，样品制备，DNA纯化过程或肮脏的塑料制品等。表1列出了一些常见的PCR特异性抑制剂及其来源的例子。
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来源 |
抑制剂 |
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血液、肌肉组织 |
肝素、血红蛋白、免疫球蛋白、蛋白酶、核酸酶、阿昔洛韦、激素、IgG、乳铁蛋白、肌红蛋白、胶原蛋白 |
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牛奶 |
蛋白酶，钙离子 |
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大便 |
胆汁盐、复合多糖、脂质、尿酸盐 |
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植物 |
果胶、多酚、多糖、木聚糖、叶绿素 |
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土壤 |
富里酸、腐殖酸、腐殖物质、金属离子、多酚 |
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样品制备 |
KCl、SDS、二甲苯 |
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DNA纯化 |
离液盐、乙醇、异丙醇、苯酚、乙酸钠 |
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脏塑料制品 |
蛋白酶，核酸酶 |
表1 PCR抑制剂
如何去除PCR抑制剂？
目前，经常使用的几种除抑制剂或降低其作用的方法。
1. 稀释含有PCR抑制剂的样品提取物。这种方式非常简单，但稀释的DNA可能不足以成功扩增DNA，并且随着稀释而降低灵敏度。
2. Chelex，例如Chelex1-100和基于苯酚-氯仿的方案。由于Chelex只能去除一些二价离子，因此这两种方法都不能去除大多数PCR抑制剂。同时，苯酚-氯仿法只能清除脂质和蛋白质。
3. 柱式色谱法，例如Sephacryl S-400，Sephadex G-200和基于二氧化硅的离心柱或磁珠，可有效去除一些抑制剂，但该过程耗时费力。
总之，尽管这些方法可以去除一些PCR抑制剂，但实际上它们具有以下局限性，例如：
1. 效率较低、耗时或需要大量手动操作。
2.操作过程中DNA样品的潜在损失。
3.高盐溶液和乙醇可能残留到到洗脱的DNA中。
4.它们不适用于高通量处理和自动化设备。
因此，Bioclone公司研发出了一种基于磁珠法的新型高效PCR抑制剂清除试剂盒。
BcMag™ One-Step PCR Inhibitor Removal Kit 是基于负相核酸纯化技术的，一种一步法DNA纯化试剂盒，可在PCR、RT和其他下游应用之前，从不纯净的DNA样品中一步去除PCR抑制剂。本试剂盒采用的磁珠是超顺磁性的磁珠，并用我们专有的化学物质进行了修饰。当磁珠与含抑制剂的样品混合时，磁珠会立刻捕获并去除PCR抑制剂。同时，将纯净得DNA保留在溶液中，可用于所有下游应用（图1）。本款磁珠可以有效地去除许多常见的抑制剂，如多酚化合物、腐殖酸/黄腐酸、酸性多糖、单宁、黑色素、肝素、洗涤剂和牛仔布染料，以及二价阳离子，如Ca2+、Mg2+等。
工作流程
操作过程非常简单快速：仅需一步，一管，一分钟完成纯化（如图一）。只需将本款磁珠添加到待纯化的DNA样品中，使用振荡器震荡或使用移液器反复吹吸，就可以捕获并清除杂质，再使用磁珠分离器将磁珠沉淀到管底，此时，上清液中为纯净的待用DNA片段。不同于传统的结合-清洗-洗脱过程，此过程中不使用任何有机溶剂，盐类或者EDTA等物质，而且接近100%回收样品。本款磁珠可在10分钟以内，同时处理96个样品，不需要昂贵的实验仪器，仅需实验常用涡旋设备，性价比非常高。
特点和优势：
l 简单的过程：不用移液，一步，一管
l 超快纯化过程：一分钟可以完成纯化，处理96个样品手动时间不超过10分钟
l 超高的纯度和回收率：DNA片段（> 50bp）回收率> 90%
l 高效的清除效率：多酚类化合物，腐殖质酸，酸性多糖，单宁酸，黑色素，去垢剂，牛仔布染料，二价阳离子如 Ca2+, Mg2+,等
l 无需纯化柱，以及过滤器，不用费力的反复移液吹吸，也不使用酒精。
l 高通量：可兼容多种不同的自动化液体处理系统
运输和储存：
l 收到后4℃保存，可储存12个月
l 不可以冷冻
