产品中心
PRODUCT CENTER
Oligo-DNA 偶联试剂盒
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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CA101 |
BcMag™ 快速 Oligo-DNA 偶联试剂盒 |
100 mg 磁珠 |
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CA102 |
BcMag™ 快速 Oligo-DNA 偶联试剂盒 |
200 mg 磁珠 |
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Cat# |
Kit components |
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CA-101 |
5ml Carboxy-terminated Magnetic beads. 5ml 2x suspension Buffer: 10ml 10x Washing Buffer 0.15 g EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide) (Upon receipt store at -20°C) |
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CA-102 |
10ml Carboxy-terminated Magnetic beads. 10ml 2x suspension Buffer: 20ml 10x Washing Buffer 0.3 g EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide) (Upon receipt store at -20°C) |
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产品特性 |
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组成 |
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磁珠大小 |
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磁珠数量 |
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磁力大小 |
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磁力类型 |
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有效密度 |
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稳定性 |
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浓度 |
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结合能力 |
结合能力 |
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储存 |
储存 |
“这种快速寡核苷酸-DNA缀合方案提供了一种简单有效的方法，用于将短寡核苷酸连接到DNA链上。
该方法适用于多种应用，包括DNA标记，引物延伸和DNA组装。”
BcMag™ Quick Oligo-DNA Conjugation Kit可以快速，有效地将寡核苷酸DNA固定到我们专有的磁珠上。为了更安全的连接，该试剂盒设计为使用交联剂为1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺（EDC），将氨基修饰的寡核苷酸共价固定到活化的羧基磁珠表面（图1）。
操作流程
BcMag™快速Oligo DNA偶联试剂盒的工作流程非常简单方便。首先，将羧基磁珠清洗并重悬于缓冲液中。然后将氨基修饰的寡核苷酸与EDC交联剂一起添加到磁珠溶液中。使反应进行过夜孵育，在此期间寡核苷酸共价固定在磁珠表面。
然后将所得的磁珠-寡核苷酸结合物清洗，并重悬于缓冲液中，准备用于下游应用，例如PCR，杂交和测序。
特点和优势
l 快速、简单的一步法操作过程
l 中性键---在羧基和氨基之间形成中性的酰胺键
l 稳定的共价键，最小的配体泄漏
l 固定效率高
l 可根据需求调整试验样品体积大小，便与自动化操作
l 结果的可重复性好
应用范围
BcMag™ 快速Oligo DNA偶联试剂盒适用于多种应用，包括PCR，杂交和测序。所得的磁珠-寡核苷酸缀合物可用于多种下游应用，包括RNA和DNA测序，突变检测和基因分型。
操作协议
此操作过程可以适当的放大或者缩小
材料要求
l 磁力分离器（手动操作使用）
根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一：BcMag™ separator-2可以容纳两个单独的1.5 ml离心管(Cat.# MS-01); BcMag™ separator-6可以容纳六个单独的1.5 ml离心管(Cat.# MS-02); BcMag™ separator-24可以容纳24个单独的1.5-2.0 ml离心管(Cat.# MS-03); BcMag™ separator-50可以容纳一个单独的50 ml离心管，一个15ml的离心管，以及四个1.5ml离心管(Cat.# MS-04); BcMag™ separator-96可配套使用 96孔 ELISA板或者96孔PCR板 (Cat.# MS-05). 对于大体积生物样品纯化，可选用陶瓷磁体块分离器（6英寸x 4英寸x 1英寸氧化铁磁体块，应用磁体，Cat# CERAMIC-B8）。
l Corning 430825 细胞培养瓶适用于大规模纯化(Cole-Parmer, Cat#EW-01936-22)
l Mini BlotBoy 3D摇床，定速型，小型10x 7.5平台，带平垫（Benchmark Scientific, Inc. Cat# B3D1008）或类似型号
A. Oligo-DNA的准备
1. 合成的oligo-DNA需要在3’或5’端修饰添加氨基。（基因合成公式会提供这种服务）
注：强烈建议在末端氨基和DNA序列之间的寡核苷酸DNA序列中添加10-15个额外的核苷酸，以克服设计目标寡核苷酸-DNA序列结合时的空间位阻问题。可用标准脱盐或其他方法纯化寡核苷酸DNA。
2. 将oligo-DNA溶解在1x suspension buffer中浓度为5-10µg/ul（可选：从oligo-DNA溶液中吸取2-5µl，转移到新的离心管中，并将管标记为C1）
B. 偶联缓冲液的准备:
1.通过向1ml 的1x suspension buffer中添加19 mg EDC制备偶联缓冲液（偶联缓冲液必须在使用前现配现用）
C.偶联反应
1.震动试剂瓶，彻底重新悬浮磁珠。
2.将1ml磁珠（20mg/ml）转移至试管中。将试管放在磁力分离器上1-3分钟。保持试管留在分离器上的同时去除上清液。
3.从磁力分离器上取下试管，并用1ml的suspension buffer将磁珠彻底再悬浮。再将试管放在磁力分离器上1-3分钟。保持试管留在分离器上的同时去除上清液。
4.重复步骤3一次
5.从磁力分离器上取下试管，并用200µl的coupling buffer彻底重新悬浮磁珠。将磁珠与步骤A.2制备的100-200µg 的oligo-DNA混合。
6.将磁珠在50°C下连续旋转培养过夜。
7.将试管放在磁力分离器上1-3分钟，当液体澄清后，去除上清液。（可选：吸取2-5µl上清液，转移到新的离心管中，并将管标记为C2）
8.用室温温度的1 ml的washing buffer 清洗磁珠，重复3次；再用65℃的d2H2O清洗2次。
9.在含有0.2%NaN3的PBS缓冲液中以5 mg/ml的浓度重新悬浮磁珠，并在4°C下储存。
D.结合效率计算
1. 测量A260的OD值
结合效率(%) = [(C1-C2)/C1] x 100%
C1:未结和的oligo DNA溶液A260x稀释倍数；C2:结合后的oligo DNA溶液A260。
2.或者使用使用荧光染料定量C1和C2中核酸浓度。
相关文献
1. Ferrier DC, Shaver MP, Hands PJW. Micro- and nano-structure-based oligonucleotide sensors. Biosens Bioelectron. 2015 Jun 15;68:798-810.
2. Sethi D, Gandhi RP, Kuma P, Gupta KC. Chemical strategies for immobilization of oligonucleotides. Biotechnol J. 2009 Nov;4(11):1513-29.
3. Zuo P, Ye BC. A novel immobilization strategy using oligonucleotide as linker for small molecule microarrays construction. Biosens Bioelectron. 2008 Jun 15;23(11):1694-700.
