产品中心
PRODUCT CENTER
快速DNA和RNA结合试剂盒
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猫。没有。 |
产品名称 |
单位规模 |
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CA103型 |
BcMag公司™ 快速DNA-RNA结合试剂盒， |
100毫克珠子试剂盒 |
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CA104型 |
BcMag公司™ 快速DNA-RNA结合试剂盒， |
200毫克珠子试剂盒 |
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猫# |
套件组件 |
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CA-103 |
100 mg 2.5µm胺封端磁珠 5ml 2x悬浮缓冲液： 10ml 10x洗涤缓冲液 0.15克EDC（1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺）（收到后储存在-20摄氏度）° |
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CA-104 |
200 mg 2.5µm胺封端磁珠 10毫升2x悬浮缓冲液： 20ml 10x洗涤缓冲液 0.3克EDC（1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺）（收到后储存在-20摄氏度）° |
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特殊性 |
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组成 |
胺封端磁珠 |
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胎圈尺寸 |
直径2.5µm |
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珠子数量 |
约1.68 x 109珠/毫克 |
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磁化 |
约45列动车组/克 |
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磁化类型 |
超顺磁性 |
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有效密度 |
2.5克/毫升 |
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稳定性 |
pH值4-10 |
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浓度 |
在d2H20中20毫克/毫升 |
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绑定容量 |
>10克寡核苷酸（25个核苷酸）/毫克 |
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存储 |
收到后保存在4C° |
用快速试剂盒释放DNA-RNA结合的力量
快速DNA-RNA结合方案试剂盒提供了快速有效结合DNA和RNA分子所需的工具。只需一步即可获得准确的结果，并利用快速试剂盒探索DNA-RNA结合的力量。
导言
已经创建了许多DNA微阵列设备和芯片来通过固相杂交检测DNA或RNA。这些生物芯片通常基于DNA在固体表面上的固定。它们可以从少量样品中收集并结合感兴趣的互补DNA/RNA。由于其在法医学，环境调查，诊断和基因表达分析，单核苷酸多态性和突变检测，DNA测序或遗传疾病诊断，基因表达分析，单核苷酸多态性和突变检测中的应用，DNA/RNA在固体表面上的固定化变得越来越重要。
BcMag公司™ Quick DNA-RNA共轭试剂盒旨在快速有效地将DNA，RNA或磷酸盐修饰的RNA/DNA寡核苷酸固定到我们专有的磁珠上。为了更安全的连接，该试剂盒设计用于使用交联剂1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC）将DNA/RNA的5'磷酸基团共价固定在胺封端的磁珠上（图1）。我们专有的中性偶联缓冲液使缀合非常有效（>85%）。缀合的DNA非常稳定，可用于许多下游应用。
特点和优势
· 快速、简单、一步到位的协议
· 中性键在磷酸盐和胺之间形成中性酰胺键
· 稳定的共价键，配体泄漏最小
· 固定效率高
· 可扩展-可轻松调整样本量和自动化程度
· 可重复的结果
协议
该协议可以适当地放大或缩小。
所需材料
• 磁性机架（手动操作）
根据样品体积，用户可以选择以下磁架之一：BcMag Rack-2用于容纳两个单独的1.5 ml离心管（目录号#MS-01）；BcMag Rack-6用于容纳六个单独的1.5 ml离心管（目录号#MS-02）；BcMag Rack-24用于容纳二十四个单独的1.5-2.0 ml离心管（目录号#MS-03）；BcMag Rack-50用于容纳一个50毫升离心管，一个15毫升离心管和四个单独的1.5毫升离心管（目录号#MS-04）；BcMag公司™ Rack-96用于固定96 ELISA板或PCR板（目录号#MS-05）。对于大规模净化，陶瓷磁体块用于大规模净化（6英寸x 4英寸x 1英寸块铁氧体磁体，应用磁体，Cat#Ceramic-B8）
• 用于大规模纯化的康宁430825细胞培养瓶（Cole Parmer，Cat#EW-01936-22）
• Mini BlotBoy 3D摇杆，定速，小型10“x 7.5”平台，带平板垫（Benchmark Scientific，Inc.Cat#B3D1008）或兼容
A. DNA/RNA样品制备
注意：
a. 所有样品（DNA/RNA）都不能悬浮在TE或含胺缓冲液中，因为它会降低偶联效率。
b. 所有样品（DNA/RNA）的5'端必须有一个磷酸基团。商业寡核苷酸合成公司可以提供这种服务或用T4 DNA激酶处理寡核苷酸DNA。寡核苷酸DNA应通过标准脱盐或其他方法纯化。
c. 扩增的PCR产物必须在偶联前通过标准程序纯化。
d. 对于所有DNA/RNA样品，小于1kb是偶联的首选。
1. 所有样品（DNA/RNA）应以5-10µg/ul的浓度悬浮在超纯水或1x悬浮缓冲液中。（可选：吸出5-10µl样品，转移到新的离心管中，并将管标记为C1）
B、 耦合缓冲准备
1、在1ml 1x悬浮液中加入19 mg EDC制备偶联缓冲液（偶联缓冲液必须在使用前立即新鲜制备）
C、 联轴器
1. 摇动瓶子以完全重悬磁珠。
2. 将1ml磁珠（20 mg/ml）转移到试管中。将试管放在磁性支架上1-3分钟。在管保持在支架上的同时除去上清液。
3. 从支架上取下试管，用1ml悬浮缓冲液彻底重悬珠子。将试管放在磁性支架上1-3分钟。在管保持在支架上的同时除去上清液。
4. 重复步骤3一次。
5. 从支架上取下试管，用200µl偶联缓冲液彻底重悬珠子。将磁珠与由A1制备的100-200µg DNA/RNA混合。
6. 将珠子在50°C下连续旋转孵育过夜。
7. 将试管放在磁性支架上1-3分钟。取出上清液，同时将管保留在支架上（可选：吸出5-10µl上清液，转移到新的离心管中，并将管标记为C2）。
8. 在室温下用1 ml洗涤缓冲液洗涤珠子三次，在65°C下用超纯水洗涤珠子两次。
9. 将珠子以5 mg/ml重悬于含有0.2%NaN3的PBS缓冲液中，并保存在4°C。
D、 耦合效率计算
1. 在A260处测量外径
耦合效率（%）=[（C1-C2）/C1]x 100%
C1:A260预偶联DNA/RNA溶液x稀释因子；C2:A260偶联后DNA/RNA溶液。
2. 使用荧光染料定量C1和C2。
一般参考文献
1. 费里尔DC，剃须刀MP，手PJW。基于微纳米结构的寡核苷酸传感器。Biosens生物电子。2015年6月15日；68:798-810。
2. Sethi D，Gandhi RP，Kuma P，Gupta KC。固定寡核苷酸的化学策略。生物技术J.2009年11月；4（11）：1513年至15129年。
3. 左P，叶BC。一种使用寡核苷酸作为小分子微阵列构建接头的新型固定化策略。Biosens生物电子。2008年6月15日；23（11）：1694-700。
