产品中心
PRODUCT CENTER
一步法 SDS 清除试剂盒
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货号 |
产品名称 |
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BC101 |
BcMag™一步法 SDS 清除试剂盒
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BC102 |
BcMag™一步法 SDS 清除试剂盒
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产品信息 |
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组成 |
二氧化硅基质，表面覆盖有高密度化学磁性树脂的磁珠 |
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稳定性 |
短期保存 (<1小时): pH 3-11; 长期保存: pH 4-10 温度: 4°C -140°C; 可溶于大多数有机溶剂 |
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磁化强度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁 |
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成分 |
100 mg / ml溶于d2H2O |
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结合力 |
48 µg/每毫克磁珠 |
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储存 |
室温运输，收到后保存在 4°C . |
简介
十二烷基硫酸钠是溶解生物材料最常用的洗涤剂之一。然而，过量的未结合洗涤剂会干扰许多下游应用，如质谱（MS）和氨基酸测序、抗原抗体结合、免疫沉淀分析和ELISA。目前有几种通用的SDS去除方案，如长时间透析、阴离子交换色谱、离心柱法和丙酮沉淀法等。然而，这些方式要么费时费力，要么会丢失样本，或者不适用于小批量样本或高通量自动化的实验要求。我们开发出了一种新型、高效的SDS去除系统来克服这些限制。 BcMag™ One-Minute SDS Removal Magnetic Beads它是用专有化学磁性树脂修饰的二氧化硅磁珠。该树脂可以快速有效地从非常小体积的蛋白质/多肽或DNA/RNA溶液中去除游离SDS（十二烷基硫酸钠）。本款磁珠可以在不到10分钟的时间内同时处理96个样品。
本款磁珠可以快速有效地从样品中去除游离SDS。过程非常简单（图1）。1.直接将磁珠添加到样品中。2.用移液器吹吸或涡旋方式捕捉游离SDS洗涤剂。3.将磁珠从蛋白质或DNA/RNA溶液中分离，纯净的蛋白质或DNA/RNA留在溶液中。与标准滴液柱法和分批法相比，易于使用的磁珠显著改善了纯化结果，使蛋白质损失降低到最小（<10%）。由于使用的磁珠体积很小，因此，样品的最终蛋白质浓度不会有显著降低。
优势及特点
l 简单的操作过程：无液体转移，仅需一管，一步操作，过程仅需1分钟
l 方便快捷
l 结果真实可靠可重复性高：对于蛋白质（>6 kDa，抑肽酶）或DNA/RNA（>25mer双链DNA）样品回收率>90%。
l 高效的清除效率：可去除95%的游离清洁剂
l 性价比高：无需离心柱、过滤器、不用反复的重复移液和使用有机试剂。
l 可用于高通量实验：与许多不同的全自动核酸提取系统兼容。
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Products |
Catalog # BC-101 |
Catalog # BC-102 |
Catalog # BC-103 |
Catalog # BC-104 |
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BcMag™ One-minute SDS Removal Magnetic Beads |
1 ml |
5 ml |
25 ml |
100 ml |
操作协议
A.材料准备
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Item |
Source |
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磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
l BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分离器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可调单通道和多通道移液器 |
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摆斗离心机 |
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如果使用96孔PCR板/管，则需要添加项目 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf™ MixMate™ |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24 × 1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 离心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，确保PCR管或PCR板锥形部分底部的井径必须≥2.5毫米。 |
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如果使用96孔微孔板需要添加的设备 |
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Fisher Scientific™ Microplate Advanced Vortex Mixers |
Fisher, Cat#:02-216-101 |
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OHAUS Microplate Vortex Mixers |
OHAUS, Cat#:30392160 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥800 rpm |
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平底透明的非结合型分析微孔板 |
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B.操作过程
1. 震动试剂瓶，使磁珠重新悬浮，直到完全均匀。
重要提示：每2分钟重新悬浮一次磁珠。分液前必须将磁珠混合。分液时，不要让磁珠静置超过2分钟。
2. 向含有洗涤剂样品中加入适量的磁珠。
重要提示：用户应根据磁珠的结合能力（48 µg/每毫克磁珠）优化游离的洗涤剂和磁珠使用比例。
**结合能力测定条件：在0.1M磷酸钠、0.15M NaCl、pH7缓冲液中，将10µl磁珠（100 mg/ml）和100µl含有洗涤剂蛋白质样品（1:400稀释的人血清）混合。并以2000 rpm的转速旋转5分钟。
3. 将样品与珠子混匀，在1-2分钟内通过移液器缓慢上下移液20-25次，或以2000 rpm（PCR
管）或800 rpm（Elisa板）的转速旋转样品5分钟。
重要提示：如果使用涡旋混合器，用户需要优化其工作的速度和时间。
4. 将反应板或样品管放在磁力分离器上30秒或直到溶液澄清。
5. 将上清液转移到干净的反应板/试管中，同时将原反应板保留在磁力分离器上。纯化好的
样品已可用于下游应用。
C.问题及建议
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Problem |
Probable cause |
Suggestion |
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蛋白回收率低 |
涡旋时间太长. |
· 如果使用其他型号的涡旋振荡器，则必须优化涡旋条件，如速度和时间。 |
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磁珠用量太多 |
完全重新悬浮磁珠，并减少磁珠的用量。 |
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洗涤剂清除失败 |
使用了不合适的试剂管或PCR板 |
确保试剂管或板锥形部分底部的井径为≥2.5毫米。 |
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涡旋速度太慢或者涡旋时间太短
样品中含有太多的 SDS |
· 增加速度或者时间 · 如果使用其他型号的涡旋振荡器，则必须优化涡旋条件，如速度和时间。 · 使用更多的磁珠重复操作过程使 |
D.参考文献
1. Puchades M, Westman A, Blennow K, Davidsson P. Removal of sodium dodecyl sulfate from protein samples prior to
matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Rapid Commun Mass Spectrom. 1999;13(5):344-9.
2. Ilavenil, S., Al-Dhabi, N.A., Srigopalram, S. et al. Removal of SDS from biological protein digests for proteomic analysis by
mass spectrometry. Proteome Sci 14, 11 (2016).
3. Oscar H. Kapp, Serge N. Vinogradov, Removal of sodium dodecyl sulfate from proteins,Analytical Biochemistry,Volume 91,
Issue 1,1978.
4. Doucette, and A. Crowell, "Precipitation of Detergent-Containing Samples for Top-Down and Bottom-Up Proteomics", in
Proteomics Technologies and Applications. London, United Kingdom: IntechOpen, 2019, Pages 230-235
5. Hou, H., He, H. & Wang, Y. Effects of SDS on the activity and conformation of protein tyrosine phosphatase from thermus
thermophilus HB27. Sci Rep 10, 3195 (2020).
6. Sun D, Wang N, Li L. Integrated SDS removal and peptide separation by strong-cation exchange liquid chromatography for
SDS-assisted shotgun proteome analysis. J Proteome Res. 2012 Feb 3;11(2):818-28.
