产品中心
PRODUCT CENTER
一步游离生物素清除试剂盒
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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BJ101 |
BcMag™ 一步法生物素清除磁珠 |
1 ml |
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BJ102 |
BcMag™ 一步法生物素清除磁珠 |
5 ml |
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产品信息 |
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组成 |
二氧化硅基质，表面覆盖有高密度专有化学基团的磁珠 |
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稳定性 |
短期保存 (<1小时): pH 3-11; 长期保存: pH 4-10 温度: 4°C -140°C; 可溶于大多数有机溶剂 |
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磁化强度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁 |
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成分 |
100 mg / ml溶于 0.2 M磷酸钠，pH7.5，0.3 M NaCl |
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储存 |
室温运输，收到后保存在 4°C . |
简介
生物素，也称为维生素H，是一种在生物样品中不常见的小分子。它对抗生物素蛋白（Ka=10 ^ 15）和链霉亲和素（Ka=10 ^ 14）具有显着的结合能力，使得生物素化分子如蛋白质或其他分子对于靶分子的非放射性检测和纯化非常适用。
生物素化是一种使用酶或化学方法将生物素共价连接到蛋白质，核酸，碳水化合物或其他分子上的过程。该过程的目的是将生物素分子连接到一个分子上，产生了一个附着有生物素的生物素化分子。然而，生物素化过程后样品中可能会残留一定量的游离生物素，这可能导致非特异性结合并导致高背景影响。因此，从样品中去除游离生物素对于成功的下游应用至关重要。
为了消除样品中过量的生物素，通常使用透析或离心柱等常规技术。然而，这些方法有一定的缺点，包括由于蛋白质沉淀，多重缓冲液交换，转移步骤，长时间的操作过程以及难以进行小体积样品或高通量自动化而导致样品丢失。
为了克服这些问题，我公司开发了一种新的高效生物素去除方式。
BcMag ™ 一步法游离生物素清除试剂盒使用经过专有化学修饰的磁珠从样品中去除游离生物素。磁珠可以快速有效地从超低体积的蛋白质/多肽或DNA/RNA溶液中去除游离生物素。磁珠还可以在不到10分钟的时间内同时处理96个样品。
使用磁珠快速有效地从样品中去除游离生物素的操作非常简单。
1将磁珠直接添加到样品中。
2通过移液或涡旋，捕获游离生物素。
3将磁珠与蛋白质或DNA/RNA的溶液通过磁性分离，而蛋白质或DNA/RNA保留在溶液中。
与标准滴注柱和分批方法相比，操作简单的磁珠法显着改善了实验结果，将蛋白质损失降低到最小（<10%）。由于仅使用少量磁珠，因此样品的最终蛋白质浓度不会显着降低。
特点和优势
l 简单的方案：无需液体转移，一管，一步，一分钟操作方案
l 操作方便
l 可靠且可重复的结果，极高的回收率>90%，蛋白质（>6 kDa，抑肽酶）或DNA/RNA（>25-mer dsDNA）
l 极佳的清除效果：去除95%游离生物素
l 成本效益：无需使用色谱柱、过滤器和费力的重复移液
l 高通量：与许多不同的自动化液体处理系统兼容
使用协议
使用者需准备材料
A．仪器
l 磁力架（适用于手动操作）
BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01);
BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02);
BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03);
BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离
心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
l 用于大规模纯化的康宁430825细胞培养瓶（Cole Parmer，目录号EW-01936-22）
操作过程
以下实验仅为个例。磁珠和样品体积可以合理放大（或缩小）。不要使用含有有机溶剂的缓冲液。
1震动试剂瓶，使磁珠完全重新悬浮，直至均匀。
重要提示：
l 分液前必须将磁珠混合。
l 在分液完成前，不要让磁珠溶液静置停留超过2分钟。每2分钟重新悬浮一次磁珠。
2.向含有游离生物素的样品中加入适量的磁珠。
重要提示：用户需要根据磁珠结合能力（约1500 pmol生物素/ml磁珠**），优化磁珠和游离生物素样品的加入比例。结合能力测定条件：将10µl磁珠（100 mg/ml）与100µl含有生物素的蛋白质样品（人血清的1:400稀释液）在0.1M磷酸钠，0.15M NaCl，pH7.5缓冲液中混合，并以2000 rpm涡旋5分钟）
3将样品与磁珠混合1-2分钟，缓慢上下移液20-25次，或在PCR板上以2000 rpm旋转5分钟，或在微孔板上以800 rpm旋转5分钟。
重要提示：如果使用涡旋混匀器，用户应优化涡旋速度和时间。
4将样品板或试管放在磁力分离器上30秒或直到溶液澄清。
5将样品板保持在磁分离器上，把上清液转移到干净的板/管中。该样本已纯化好用于下游应用。
