产品中心
PRODUCT CENTER
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产品信息 |
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组成 |
表面覆盖有高密度专有化学官能团的磁珠
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稳定性 |
短期保存 (<1小时): pH 3-11; 长期保存: pH 4-10 温度: 4°C -140°C; 可溶于大多数有机溶剂 |
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磁化强度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁 |
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浓度 |
100 µg / ml 溶于 dH2O |
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结合能力 |
50 µg 蛋白 /mg磁珠 |
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储存 |
室温运输，收到后保存在 4°C . |
简介
生物流体样品研究中，生物样品中蛋白质和脂质的存在经常会干扰小分子分析，造成准确性和灵敏度的降低。许多生物研究实验都需要在分析前去除样品中的蛋白质（脱蛋白）和脂质（脱脂），例如LC/MS/MS分析。
在过去的半个世纪里，人们使用三氯乙酸、高氯酸、磷钨酸、乙腈、甲醇和其他一些有机溶剂进行沉淀的方法被广泛用于脱蛋白。然而，这些程序不仅繁琐、耗时、难以适应自动化，而且去除脂质效率非常低。 BcMag™ One-minute Deproteinizing Magnetic Beads 为从细胞裂解、血浆、血清、组织匀浆、尿液等生物液体样品中分离蛋白质、去脂和核酸提供了一种新的解决方案，用于分析各种小分子。我们的超顺磁性磁珠利用表明结合的专有基团，可高效地结合样品中的蛋白质和脂质。该实验过程简单方便，仅需一步操作一个试管，无需沉淀、过滤、离心等步骤。本款磁珠可以在不到10分钟的时间内同时处理96个样品。
操作流程
优势及特点
l 快速简单的操作过程：仅需一个试管，一步操作无液体转移，不到10分钟的时间内同时处理96个样品
l 易于使用：无需离心柱、过滤器、费力的反复移液或离心，并且可以根据实验需要调整样本体积大小和适用于自动化操作
l 无需有机溶剂/酸进行沉淀
l 极高的脱蛋白效率
操作协议
A.材料准备
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Item |
Source |
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磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
l BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分离器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可调单通道和多通道移液器 |
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摆斗离心机 |
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如果使用96孔PCR板/管，则需要添加项目 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf™ MixMate™ |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24 × 1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 离心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，确保PCR管或PCR板锥形部分底部的井径必须≥2.5毫米。 |
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如果使用96孔微孔板需要添加的设备 |
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Fisher Scientific™ Microplate Advanced Vortex Mixers |
Fisher, Cat#:02-216-101 |
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OHAUS Microplate Vortex Mixers |
OHAUS, Cat#:30392160 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥800 rpm |
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平底透明的非结合型分析微孔板 |
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B.操作过程
提示：
l 不要使用含有有机溶剂的缓冲液。
l 为获得最佳结果，确保样品pH值保持在~4.5。
1. 用醋酸钠或其他缓冲液稀释并调整样品中的蛋白质浓度~1mg/ml，pH值至4.5。
2. 震动试剂瓶，使磁珠重新悬浮，直到完全均匀。
重要提示：每2分钟重新悬浮一次磁珠。分液前必须将磁珠混合。分液时，不要让磁珠静置超过2分钟。
3. 向样品中加入适量的磁珠（应根据样品中蛋白质浓度和磁珠结合能力计算磁珠用量，
~50µg蛋白质/毫克磁珠）
4. 将样品与珠子混匀，在1-2分钟内通过移液器缓慢上下移液20-25次，或以2000
rpm（PCR管）或800 rpm（Elisa板）的转速旋转样品5分钟。
重要提示：用户需要根据表1中列出的磁珠结合能力，以及所使用涡旋混合器时的
速度和时间，优化磁珠和生物样品的比例。
5. 将反应板或样品管放在磁力分离器上30秒或直到溶液澄清。
（选项：以3500 rpm的转速离心45秒）
6. 将上清液转移到干净的反应板/试管中，同时将原反应板保留在磁力分离器上。纯化
好的 样品已可用于下游应用。
C.问题及解决方法
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问题 |
可能原因 |
建议 |
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蛋白清除效率低 |
· 样品中蛋白含量太多 · 检查样品的pH值， 确保pH 为 4.5. |
· 对样品再次纯化 · 调整pH到4.5. |
D.参考文献
1. Hušek P, Svagera Z, Hanzlíková D, Simek P. Survey of several methods deproteinizing human plasma before and within the
chloroformate-mediated treatment of amino/carboxylic acids quantitated by gas chromatography. J Pharm Biomed Anal. 2012 Aug-Sep;67-68:159-62. doi: 10.1016/j.jpba.2012.04.027. Epub 2012 May 7. PMID: 22633606.
2. Sakuma R, Nishina T, Kitamura M. Deproteinizing methods evaluated for determination of uric acid in serum by
reversed-phase liquid chromatography with ultraviolet detection. Clin Chem. 1987 Aug;33(8):1427-30. PMID: 3608161.
3. Álvarez-Guerra ED, Parkes HG, Bell JD. Comparative study of two deproteinization methods for the evaluation of whole
blood and plasma by magnetic resonance spectroscopy. Bioquimia. 20
