产品中心
PRODUCT CENTER
一步法DNA和RNA清除试剂盒
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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AV101 |
BcMag™ 一步法DNA和RNA清除试剂盒 |
1ml |
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AV102 |
BcMag™ 一步法DNA和RNA清除试剂盒 |
3ml |
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运输和储存：收到试剂盒后，将试剂盒组分储存在-20°C。
配方：液体成分（50 mM Tris-HCl，pH 8.0、50 mM NaCl，5 mM MgCl2和50%甘油）
活性：1μl磁珠将在37°C下于30分钟内在50 mM Tris-HCl，pH 8.0、50 mM NaCl，2 mM MgCl2中，可将10μg超声处理的鲑鱼精子DNA降解成酸溶性寡核苷酸。
装运：在常温环境下装运（在室温下至少稳定20天）。收到后，将核酸酶磁珠保存在-20°C。等分试样以避免反复冷冻和解冻。
使用我们的一步DNA和RNA清除试剂盒，可以有效去除样品中的DNA和RNA。简化的方案、可靠的结果和简单的操作使其成为您DNA和RNA去除需求的完美选择。
简介
BcMag ™ 一步法DNA和RNA清除试剂盒使用核酸内切酶固定的磁珠，仅需一步操作就可从样品中去除DNA和RNA。重组核酸内切酶是在大肠杆菌中合成的马其顿沙雷氏菌的超纯重组核酸内切酶（由与默克苯甲酸酶核酸酶或涡轮核酸酶同一基因编码）。这种核酸酶可以非特异性地将各种DNA和RNA变体（包括单链和双链DNA和RNA）消化为长度为2-8个碱基的5"-磷酸化寡核苷酸，并且不具有蛋白酶活性。含有核酸酶的核酸酶磁性颗粒能有效去除蛋白质溶液中的所有核酸（DNA和RNA），且由于核酸酶与磁性颗粒以共价键稳定结合，溶液中不会残留核酸内切酶。
应用方向
强效核酸酶磁珠是去除纯化蛋白或其他生物样品制备中核酸污染的理想工具。
特点与优势
l 高效的一步法无萃取流程（见图一）
l 快捷：可在不到30分钟的时间内处理96个生物样本，手动操作时间不超过10秒。
l 反应结束后可对回收的磁珠进行核酸酶恢复，以便于重复使用
l 使用者可非常简便的从蛋白质样品中分离出核酸内切酶磁珠
l 核酸内切酶非常稳定的与磁珠结和
l 性价比高：无需离心柱、过滤器、不用反复的重复移液和使用有机试剂。
l 可用于高通量实验：与许多不同的全自动核酸提取系统兼容。
使用协议
A.材料准备
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Item |
Source |
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磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04） |
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BcMag 96孔磁力分离器 |
BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
B.操作过程
l 不要使用含有有机溶剂的缓冲液。
l 通常情况下，可直接向含有任何普通缓冲液的受污染的核酸中加入所需量的核酸内切酶颗粒。但是，为了获得最佳结果，用户应参考下表。
工作条件表
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条件 |
最佳条件 |
工作范围 |
抑制作用 |
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Mg2+ |
1-2 mM |
1–9 mM |
N/A |
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Dithiothreitol (DTT) |
0–95 mM |
>100 mM |
N/A |
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2-Mercaptoethanol |
0–90 mM |
>100 mM |
N/A |
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Temperature |
37 °C |
0–50 °C |
N/A |
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Monovalent cation (Na+, K+, etc.) |
0–20 mM |
0–150 mM |
N/A |
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pH |
8.0–9.0 |
6.0–10.0 |
N/A |
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PMSF |
1 mM |
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CaCl2 |
N/A |
N/A |
100 mM降低 75% 酶活性 |
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1M NaCl |
N/A |
N/A |
1 M降低75% 酶活性
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Guanidine HCl |
N/A |
N/A |
100 mM,完全抑制酶活力 |
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EDTA |
N/A |
N/A |
1mM降低 30% 酶活力 100 mM 完全抑制酶活力 |
1. 震动试剂瓶，使磁珠完全重新悬浮，直至均匀。
重要提示：在分液前将磁珠混合是非常重要的。并且在分液完成前，不要让磁珠溶液静置停留超过2分钟。每2分钟重新悬浮一次磁珠。
2. 在含有核酸的蛋白质样品中加入适量的磁性颗粒
3. 在1-2分钟内缓慢上下移液吹吸20-25次，将样品与磁珠混合，或以2000 rpm的转速旋
转样品2分钟。
4. 在37°C下培养30分钟。
5. 将含有样品的试管放在磁力分离器上30秒或直到溶液澄清。（选项：以3500 rpm的转速
离心45秒）
6. 将上清液转移到另一个干净的板/管中，同时将原样品板保留在磁力分离器上。纯化好的
样品已可以用于下游应用。
C.参考资料
1. Lehman, I.R., Nussbaum A.L., The deoxyribonucleases of Escherichia coli. V. On the specificity of exonuclease I
(phosphodiesterase), J. Biol. Chem., 239, 2628-2636, 1964.
2. Werle, E., et al., Convenient single-step, one tube purification of PCR products for direct sequencing, Nucleic Acids Res.,
22, 4354-4355, 1994.
3. Nabavi S., Nazar R.N., Simplified one tube “megaprimer” polymerase chain reaction mutagenesis, Anal Biochem., 2, 346-
348, 2005.
4. Rosamond, J., et al., Modulation of the action of the recBC enzyme of Escherichia coli K-12 by Ca2+, J. Biol. Chem., 254,
8646-8652, 1979.
5. Sasaki, Y., Miyoshi, D. and Sugimoto, N., Regulation of DN nucleases by molecular crowding., Nucleic Acids Res., 35,
4086-4093, 2007.
6. References 1. Lehman, I.R. and Nussbaum, A.L. (1964) J. Biol. Chem. 239, 2628. 2. Kusher, S.R. et al., (1971) Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 68, 824. 3. Kusher, S.R. et al., (1972) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69, 1366. 4. Goldmark, P.J. and Linn, S. (1972) J. Biol. Chem. 247, 1849. 5. Rosamond, J. et al., (1979) J. Biol. Chem. 254, 8646.
