产品中心
PRODUCT CENTER
一步法DNA和RNA纯化试剂盒
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货号 |
产品名称 |
产品规格 |
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AH101 |
BcMag ™ 一步DNA-RNA纯化试剂盒 |
1ml |
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AH102 |
BcMag ™ 一步DNA-RNA纯化试剂盒 |
5ml |
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使用一步法DNA和RNA纯化试剂盒可实现高质量的DNA/RNA纯化。去除引物二聚体和游离核苷酸等杂质。
简介
BcMag ™ 一步法DNA和RNA纯化试剂盒，可通过负相纯化技术从待纯化的DNA/RNA样品中一步操作去除杂质。杂质包括DNA/RNA聚合酶、修饰酶、限制性内切酶、连接酶、磷酸激酶、核酸酶、磷酸酶、蛋白质、大多数洗涤剂、大多数荧光或非荧光染料、二价阳离子如Ca2+、Mg2+、过量引物、二聚体、衔接子、DNA/RNA片段（<100-mer ssDNA）、游离dNTPs/NTPs及其类似物，包括放射性标记的，生物素化和荧光衍生物。
该方案操作简单：仅需一管，一步，一分钟（图1）。将磁珠直接添加到待纯化的DNA/RNA样品中，通过涡旋或移液以捕获和去除杂质。涡旋/移液后，磁珠被磁力架捕获，而上清液中含有纯化的，可进行下有反应的样品。磁珠适用于DNA/RNA片段，质粒DNA和基因组DNA。
特点及优势
l 简单的过程：不用移液，一步，一管
l 超快纯化过程：一分钟可以完成纯化
l 超高的纯度和回收率：回收率> 90%
l 高效的清除效率：可以清除过量的引物 (<100 mers ssDNA),二聚体，接头分子，盐
如 Mg2+，洗涤剂，dNTPS,各种酶，以及荧光物质。
l 无需纯化柱，以及过滤器，不用费力的反复移液吹吸，也不使用酒精。
l 高通量：可兼容多种不同的自动化液体处理系统
操作流程
A.用户所需材料
l 18.2 MΩ.cm, 无DNase/Rnase的超纯水
l Triton™ X-100, Sigma, Catalog # T8787
l 其他
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Item |
Source |
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磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
l BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分离器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可调单通道和多通道移液器 |
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摆斗离心机 |
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如果使用96孔PCR板/管，则需要添加项目 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf™ MixMate™ |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24 × 1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 离心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 **重要提示! 如果使用其他管或PCR板，确保PCR管或PCR板锥形部分底部的井径必须≥2.5毫米。 |
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B.实验步骤
重要提示！
l 以下过程是经过优化的用于高效纯化10µl DNA样品。如果应用于其他体积的反应条件，
则需要对操作步骤进行优化。
l 磁珠使用前，请先将磁珠彻底涡旋或震荡悬浮，确保磁珠处于混匀状态
l 不允许磁珠在静置2分钟后再进行产品的使用
l 根据应用，用户应根据表1选择缓冲条件。例如，如果样品不含去垢剂，则需要添加
1μL 1%Triton™ X-100至10μL样品（最终浓度为0.1%）中。
l 核酸定量：仅可使用荧光方法检测，如qPCR、Qubit和Pico Green。
表一
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DNA 片段清除 |
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+ 0.1% Triton x-100, pH7.5 |
- 0.1% Triton x-100 pH7.5 |
+ 0.1% Triton x-100 pH 8.0 |
- 0.1% Triton x-100 pH 8.0 |
+ 0.1% Triton x-100 pH 8.8 |
- 0.1% Triton x-100 pH 8.8 |
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dsDNA (100 bp) |
未清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
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dsDNA (150 bp) |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
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dsDNA (200 bp) |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
未清除 |
清除 |
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dsDNA (300 bp) |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
未清除 |
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ssDNA 100 mer |
清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
清除 |
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dsDNA- 双链 DNA; ssDNA- 单链 DNA上 述验证时通过下列条件完成的: 1. 10 mM Tris-HCl 含有或者不含有 0.1% triton (最终含量) 以及以下三个变量: pH 7.5, pH 8.0 和 pH 8.8 |
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1. 添加5ul磁珠产品到10ul的DNA待纯化样品中。
2. 如果需要，可短暂的2500rpm离心30秒，使所有成分都处于试管底部
3. 彻底混匀1分钟，通过缓慢的使用移液器吹吸25次（一分钟时间）；或者2500 rpm
涡旋震荡5分钟。
4. 如果需要，可短暂的2500rpm离心30秒，使所有成分都处于试管底部
5. 将装有样品的试管放入磁力分离器中30秒，直到磁珠彻底被吸附到试管底部，上清
液变澄清为止。
6. 将试管保持在磁力分离器中，同时，将上清液转移到一个干净的试管当中，用于下
游实验。
C.故障排除
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DNA回收率低 |
涡旋时间太长 或者涡旋速度太快 |
· 减少涡旋时间或者速度 · 如果使用其他型号的涡旋混匀器，则涡旋时间和速度需要重新优化 |
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磁珠使用过多 |
彻底的悬浮磁珠，并准确的加入磁珠的用量 |
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样品缓冲液未优化 |
· 如果样品中不含有去垢剂，向样品中添加曲通拉X-100（最终浓度为0.1%） |
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杂质去除失败 |
PCR 管或者PCR 板型号不对 |
确保PCR 管或者PCR 板的底部圆锥形截面直径≥2.5mm. |
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涡旋的速度太慢或者涡旋时间太短 |
· 增加涡旋的速度或者涡旋时间 · 如果使用其他型号的涡旋混匀器，则涡旋时间和速度需要重新优化. |
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磁珠使用量太少 |
彻底的悬浮磁珠，并准确的加入磁珠的用量 |
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DNA片段有较强的二级结构 (<50bp dsDNA or < 100 mer ssDNA) |
通过95°C加热2分钟使样品变性 |
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有太多的引物，二聚体，衔接体，游离染料或者去垢剂 |
· 增加磁珠使用量 · 进行第二次纯化，按照相同的纯化过程 |
