产品中心
PRODUCT CENTER
快速HSA/IgG清除试剂盒
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货号 |
产品名称 |
规格 |
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BF101 |
BcMag ™ 快速HAS和IgG清除试剂盒 |
25 preps |
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BF102 |
BcMag ™ 快速HAS和IgG清除试剂盒 |
100 preps |
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产品属性 |
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组成 |
表面覆盖有高密度专有化学官能团的磁珠 |
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磁化强度 |
60 EMU/g |
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磁化类型 |
超顺磁 |
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有效密度 |
2.5g/ml |
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浓度 |
30 mg/ml (dH2O) |
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绑定容量 |
10ul血清/30ul磁珠 |
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存储条件 |
收到后保存在4C° |
快速HSA/IgG清除试剂盒
使用我们的快速HSA/IgG清除试剂盒，使用专有磁珠，快速轻松地从血清和血浆样品中去除白蛋白和IgG。富集和洗脱的蛋白质用于下游应用，例如生物标志物检测和蛋白质组分析。
血清和血浆经常用于临床和药物蛋白质组学研究，以发现治疗靶点的早期诊断生物标志物。这些体液样本是在非创伤条件下，易于获得的，它们中会含有一些高浓度的蛋白质，这些高浓度蛋白质会对一些含量较低蛋白的观察造成影响。在血清生物标志物的研究中，主要问题就是如何消除丰富的高浓度蛋白质，同时发现和富集低丰度的蛋白质。可以大量表达的蛋白质，如白蛋白和IgG，占血清/血浆总蛋白质的70%。相反，蛋白质生物标志物的含量可能要低得多（pg/ml）。高丰度蛋白质会为一维和二维电泳，高效液相色谱和质谱等分析程序带来困难，因为它们在研究中，会掩盖那些表达量较小的 目标蛋白质。必须有效，可重复地从血液样本中明确清除掉高丰度蛋白质，才可以正确的检测低丰度蛋白质。在进行蛋白质组分析之前，特别是在使用质谱法时，必须从人体样品（例如血浆，血清，尿液或脑脊液）中选择性去除白蛋白。
目前常用的白蛋白去除方式为，亲和染料配体Cibacron Blue F3GA共价键合到市售载体上，用于从水溶液和人血浆中吸附HSA，但这种清除方式缺乏选择性。在免疫亲和系统中，还会使用抗白蛋白抗体进行白蛋白清除。使用蛋白A用于去除IgG蛋白。这些技术通常具有合理的特异性，但使用成本较高。此外，由于这些清除方式中许多都是基于琼脂糖树脂或其衍生柱进行的，因此它们在对浓度较低蛋白进行富集时过程非常耗时，而且无法在短时间内处理大量样品，并且难以适应自动化系统。同时，使用这些方法去除蛋白质通常需要增加样品体积来进行实验，因此需要额外的蛋白质浓缩步骤。为解决上述问题，急需具有极高的效率，均匀性和吞吐量的新白蛋白和IG去除方法。
BcMag ™ 快速HSA/IgG清除试剂盒是基于我们独特的磁珠，经过我们专有的化学修饰，可快速轻松地从血清和血浆样品中去除白蛋白和IgG。在特定的缓冲条件下，磁珠与样品中的所有其他蛋白质（白蛋白和IgG除外）结合，允许结合和释放除白蛋白和IgG以外的所有低浓度的蛋白质。富集和洗脱的蛋白质可用于下游应用，例如蛋白质组分析，生物标志物检测，酶测定，SELDI分析，蛋白质阵列像素化，1D和2D凝胶电泳，LC/MS和MALDI-TOF MS。
快速HSA/IgG清除试剂盒的工作流程
使用白蛋白去除试剂盒非常简单。将磁珠与血清或血浆样品混合，并连续旋转孵育。在混合过程中，磁珠保持悬浮在样品溶液中，使样品中的所有其他蛋白质（白蛋白和IgG除外）与磁珠结合。孵育后，收集磁珠并使用磁力架将其与样品分离。然后洗脱结合的蛋白质。
特点和优势
· 快速，简单，无需色谱柱，离心机或过滤器。
· 去除>95%的IgG和90%的白蛋白。
· 高通量：在不到30分钟的时间内可快速处理96个样品
· 低丰度富集等于或优于六肽或抗体
· 温和的洗脱条件，保留了原蛋白的三级结构，并易于进行到二次分析。
· 根据实验需求可轻松调整样本量体积大小和自动化程度
· 最小的样品稀释度
· 适用于LC-MS，及基于蛋白质活性的分析和蛋白质组学研究。
协议
注释
· 以下实验是一个例子。血清中的蛋白质浓度可能会有所不同。10ul人血清含有约700ug的完整蛋白质。其中约70%将是人血清白蛋白和IgG。每个反应中使用的血清量应由用户优化。系统过载可能导致白蛋白携带到低丰度蛋白质部分。使用给定的方案，用户应该将洗脱蛋白含量在50-100µg血清蛋白。
· 样品在含盐缓冲液中洗脱，可能需要在电泳或质谱分析之前脱盐。如果样品在分析前被充分稀释，则可不需要脱盐。
所需材料
· BcMag ™ 快速HAS- IgG清除磁珠
· 1x结合/洗涤缓冲液：20 mM磷酸钠，pH 6.5
· 1x洗脱缓冲液：100 mM甘氨酸HCl，pH 2.7
材料准备
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Item |
Source |
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磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
l BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分离器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可调单通道和多通道移液器 |
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摆动离心机 |
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如果使用96孔PCR板/管，则需要添加项目 |
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涡悬混合器 **用户还可以使用其他型号的涡悬混合器。但是，时间和速度应进行优化，并且混合器应满足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 转速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf™ MixMate™ |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24 × 1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 离心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，确保PCR管或PCR板锥形部分底部的井径必须≥2.5毫米。 |
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程序
注意：
l 震动试剂瓶，使磁珠重新悬浮，直到完全均匀。
· 分液时，不要让磁珠静置超过5分钟。
1.将40µl磁珠转移到新管或新的96孔PCR板，微孔板或0.2ml PCR管中，并添加50µl结合缓冲液至最终90µl反应体积。
2. 加入10µl血清样品，通过缓慢上下移液20-25次将样品与磁珠混合，或以2000 rpm的转速涡旋样品5min（见图）。
3. 将样品板/管放在磁力架上30s或直到溶液澄清。
4. 弃去上清液，同时样品板保留在磁力架上。
5. 通过缓慢上下移液20-25次，用100μL结合缓冲液洗涤磁珠，或以2000 rpm的转速涡旋样品2min。将样品板/管放在磁力架上30s或直到溶液澄清。
6. 重复步骤5一次
7. 将磁珠重悬于50-100µl洗脱缓冲液中，并通过缓慢上下移液20-25次将样品与磁珠混合，或以2000 rpm涡旋样品5分钟。
8. 将上清液转移到新的微量离心管或微量滴定板中。含有目标蛋白质的上清液纯化完成，可用于下游应用。
