产品中心
PRODUCT CENTER
固定化TCEP二硫键还原磁珠
|
货号 |
产品名称 |
产品规格 |
|
|
|
BH101 |
BcMag ™ 固定化TCEP二硫化物还原试剂盒 |
100mg |
|
|
|
BH102 |
BcMag ™ 固定化TCEP二硫化物还原试剂盒 |
500mg |
|
|
规格 |
|
|
组成 |
表面连接有TCEP基团的磁珠。 |
|
磁化强度 |
~40-45 EMU/g |
|
磁化类型 |
超顺磁 |
|
有效密度 |
2.0克/毫升 |
|
储存状态 |
冻干粉 |
|
有效浓度 |
TCEP浓度>12 mM/ml |
|
存储 |
室温运输，收到后保存在 4°C . |
TCEP磁珠可有效还原二硫键
使用我们的TCEP还原磁珠，可以轻松减少蛋白质和肽中的二硫键。我们专门设计的磁珠不再需要耗时的分离程序。
简介
BcMag ™ 固定化TCEP二硫键还原试剂盒（TCEP还原磁性基质）使用我们专门设计的磁珠，可有效还原蛋白质，多肽和其它含二硫键的分子中的二硫键（图1）。TCEP（[三（2-羧乙基）膦]还原磁性基质避免了耗时的实验过程，不需要离心柱和分离柱操作，就可将还原样品与还原剂分离。
固定化TCEP二硫化物还原磁珠，可以实现样品和还原剂的快速分离回收。TCEP是蛋白质，多肽和其他含二硫键的分子中有效的二硫键还原剂，对其他官能团相对无反应。三烷基膦TCEP在水溶液中稳定，不会像其他还原剂如二硫苏糖醇（DTT）和-巯基乙醇（BME）那样快速氧化。TCEP对常见的巯基反应性化学物质（例如马来酰亚胺交联剂）几乎没有影响。尽管如此，许多实验要求被还原样品与还原剂需要进行分离操作。
磁珠比传统的色谱法（例如纯化柱，琼脂糖或非磁性树脂）具有显着的优势。基于磁珠的格式可以在短时间内快速高产率处理96个样品，各种样品的回收率达到95%以上。而当使用基于色谱柱的技术时，在学术研究实验室中处理多个样品时，可能需要大量的手动移液操作。这种实验方式可能会造成不同人员进行实验，目标生物分子回收效率的差异。实验员和学生可能需要广泛的培训和实践才能实现稳定的蛋白质回收率。相比较传统方法，磁珠具有许多优点，例如它们易于使用，快速的实验方案，适用性以及高通量自动化和小型化处理的便利性。
特点和优点：
• 回收率高，不含还原剂-----去除还原剂同时，在不损失样品的情况下回收被还原的分子，是DTT或巯基乙醇（BME）很难实现的。固定化TCEP使您能够在不进行透析或脱盐的情况下，以高收率（90%或更高）回收蛋白质/多肽。
• 无任何异味----与DTT或BME不同，固定化TCEP是无味的，可以在普通操作台上进行还原。
• 稳定性好-----固定化的TCEP稳定性消除了在处理，使用或储存固定化的TCEP二硫化物还原磁珠时，需要进行防止氧化的特殊措施的需要。
易于使用-----固定化TCEP还原磁珠，在您使用时，可根据需要分配每个实验所需的用量。可以在不同的pH值（从4到9）和温度（5到95°C）下进行还原反应。
操作说明
注意事项：
· 还原发生在较宽的pH（pH 4.0-9.0）和温度范围（5°-95°C）内。
· 大多数蛋白质可以在不使用变性剂的情况下有效还原。然而，添加变性剂如6M盐酸胍，将有助于将内部二硫化物暴露出来，与固定的TCEP反应，确保完全还原。不建议使用尿素作为变性剂，因为它会产生与巯基反应的氰酸盐。
· 在还原过程中，样品缓冲液中加入5-20 mM EDTA可防止二价离子（例如Zn2+，Cu2+和Mg2+）使巯基再氧化。
· 由于二硫化物会随着时间的推移而再生，因此还原后的样品应在还原后立即使用。
· TCEP固定的磁珠仅为一次性使用产品。
以下方案是二硫化物还原的一个例子。为了获得最佳结果，我们建议进行滴定以优化每次实验所用的磁珠量。该协议可以按比例放大/缩小。
缓冲液：
• 20Mm EDTA
• dH2O（Milli-Q超纯水）
设备
|
Item |
Source |
|
磁力分离器
**根据样品体积，用户可以选择以下磁力分离器之一 |
l BcMag™ separator-2 适用于两个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag™ separator-6 适用于六个单独的1.5毫升离心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag™ separator-24 适用于24个单独的1.5-2.0 ml离心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag™ separator-50 适用于1个单独的50毫升离心管，1个单独的15毫升离心管, 以及4个 1.5毫升 离心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
|
|
BcMag 96孔磁力分离器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分离器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
|
可调单通道和多通道移液器 |
|
操作过程
A. 磁珠制备
1. 用用dH2O悬浮所需用量的磁珠，最终浓度为50 mg/ml。
注意：为了获得最佳效果，请现配现用磁珠。悬浮的磁珠可以在4ºC下保存一周而不会降低活性。
2. 使用前摇动或涡旋试剂瓶，以完全悬浮磁珠。
注意：在分配之前，不要让磁珠放置超过2分钟。
B. 样品制备
1. 将所需量的磁珠转移到离心管中。
注意：优化每个实验使用的磁珠数量。通常，对于30-50µl蛋白质/多肽样品（50-80µg），需使用30-50µl（3mg-5mg磁珠）的TCEP二硫化物还原磁珠。
2. 将试管放在磁力分离器上1-3分钟，直到上清液变清。在试管保持在磁力分离器上的同时，除去上清液。
3. 加入样品，并通过缓慢上下移液25次（一分钟）或通过涡旋混合器以2000 rpm的速度完全混合5分钟，混匀样品。
4. 将它们在室温下，温和旋转孵育1小时。
5. 将试管放在磁力分离器上1-3分钟，直到上清液变清。在试管保持在磁力分离器上的同时，除去上清液。
故障排除
|
问题 |
可能的原因 |
建议 |
|
样品还原不良 |
使用的磁珠数量较少 |
使用推荐量的磁珠 |
|
孵育时间太短。 |
增加孵化时间 |
|
|
蛋白质中的二硫化物在空间上未能与磁珠表面TCEP接触。 |
向还原缓冲液中加入6 M盐酸胍。 |
|
|
孵育时间过长。 |
不要超过2小时的孵化时间 |
|
|
磁珠还原能力降低 |
该产品已保存超过一年。 |
购买新产品 |
参考文献
1.Zwyssig A, Schneider EM, Zeltner M, Rebmann B, Zlateski V, Grass RN, Stark WJ. Protein Reduction and Dialysis-Free Work-Up through Phosphines Immobilized on a Magnetic Support: TCEP-Functionalized Carbon-Coated Cobalt Nanoparticles. Chemistry. 2017 Jun 27;23(36):8585-8589.
2.Tzanavaras PD, Mitani C, Anthemidis A, Themelis DG. On-line cleavage of disulfide bonds by soluble and immobilized tris-(2-carboxyethyl)phosphine using sequential injection analysis. Talanta. 2012 Jul 15;96:21-5.
3.Han J, Clark C, Han G, Chu TC, Han P. Preparation of 2-nitro-5-thiobenzoic acid using immobilized Tris(2-carboxyethyl)phosphine. Anal Biochem. 1999 Mar 15;268(2):404-7.
4.Han, J.C., et al. A procedure for quantitative determination of tris(2-carboxyethyl)phosphine, an odorless reducing agent more stable and effective than dithiothreitol. Anal Biochem (1994) 220:5-10
