产品中心
PRODUCT CENTER
高效的FFPE和FNA DNA提取试剂盒
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货号 |
产品名称 |
规格 |
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AJ101 |
BcMag ™ 一步法FFPE和FNA DNA纯化试剂盒 |
50 preps |
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AJ102 |
BcMag ™ 一步法FFPE和FNA DNA纯化试剂盒 |
100 preps |
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组分 |
存储条件 |
50 preps，货号#AJ101 |
100 preps，货号#AJ102 |
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BcMag™ U-DNA Beads |
4°C |
2.5 ml |
5.0 ml |
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10x Lysis Buffer (100mM Tris-HCl, PH 9.0) |
4°C |
0.6 ml |
1.2 ml |
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Proteinase K |
-20°C |
12.5 mg |
25 mg |
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DTT(1M) |
-20°C |
15.4 mg |
30.8 mg |
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Proteinase K Suspension Buffer |
4°C |
1.0 ml |
2.0 ml |
运输和储存：根据下表，在收到货物时储存各组分。
简介
福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织和细针穿刺活检（FNA）是病理学家使用的档案组织样本的流行来源。它可以在室温下长期保存组织样本，非常方便。因为这种组织保存方式是标准保存方法，所以它也是生物学研究材料的主要来源。分子肿瘤学诊断的关键步骤之一是获得高质量的基因组DNA。FFPE或FNA衍生的DNA突变分析有助于诊断大多数实体瘤疾病。表皮生长因子受体（EGFR），Kristen Ras基因（KRAS），神经母细胞瘤Ras基因（NRAS）以及使用FFPE DNA进行显着突变基因热点检测的，新一代测序等研究对于确定特定的癌症治疗至关重要。
然而，从这些组织中提取出 基因组DNA是一个艰难的挑战，主要是由于福尔马林的固定，会导致蛋白质和DNA之间的交联以及不同的DNA交链。因此， DNA经常被广泛破坏和片段化。碎裂程度取决于组织类型，样品存放时间和特定的固定程序。这些特性可能会对下游应用产生影响，其中许多应用都需要使用PCR。因此，从FFPE组织中提取DNA必须成功提取出这些高度片段化的基因组DNA，并需要解决福尔马林固定产生反向交联。
为了提取足够的基因组DNA（gDNA）进行下游分析，几种市售的核酸提取试剂盒需要至少10µm的起始生物检测材料。由于这些生物检材都是从人类患者那里获得的，因此提取试剂盒优劣至关重要，因为它规定了所需生物检材的大小以及对每个FFPE块进行的分析次数。而一些存储的组织由于太小而无法满足这种条件，因此这种限制就降低了可行应用的次数。此外，使用这些试剂盒进行DNA提取可能很耗时，“结合-洗涤-洗脱”过程也可能会导致大量DNA丢失。
BcMag ™ 一步法FFPE＆FNA DNA纯化试剂盒旨在从2µm-5µm福尔马林固定，石蜡包埋（FFPE）组织或细针穿刺活检样品中有效且有序的提取出总核酸。该试剂盒使用我们独特的磁珠，在水性缓冲液中有效去除FFPE组织样品中的石蜡，同时对组织进行再裂解。该过程清除了易燃和有气味的二甲苯或d-柠檬烯，以及从通常用于脱蜡的，且难以看到的组织颗粒中残留的有机溶剂。此外，该试剂盒是独特的，因为它的专有磁珠可以仅需一步从样品中去除PCR抑制剂，而无需DNA提取过程。
图1：细胞裂解物清除和PCR抑制剂去除
因此，它增加了核酸的回收率，避免了传统DNA提取技术中，使用的耗时的“结合-洗涤-洗脱”过程引起的DNA损失。样品裂解后，简单的一步法纯化技术非常适合同时处理>96个样品，并在不到30分钟内完成DNA纯化。纯化的基因组DNA具有极高的完整性，可用于各种下游应用，例如qPCR，突变筛选，微阵列分析，测序，Southern印迹和SNP分析。
一步法FFPE和FNA DNA分离的工作流程和结果
1.为了裂解样品，向样品中加入功能磁珠和蛋白酶K，并在65°C下孵育。
2.将样品涡旋/吹吸，以便于磁珠以捕获PCR抑制剂。
3、用磁力架将磁珠与样品分离。
4. 吸出含有纯净DNA/RNA的上清液。
图2：一步法FFPE和FNA DNA 纯化的工作流程
特点和优势：
• 快速有效的纯化方案：无需事先进行DNA分离，即可用于直接工作流程，无需液体转移和一管。
• 超快：在不到一小时内处理96个样品。
• 最高的核酸回收率：提取过程中DNA的损失最小
• 有效去除抑制剂：多酚化合物、腐殖酸/富里酸、酸性多糖、单宁、黑色素、肝素、洗涤剂、牛仔布染料、二价阳离子如Ca2+、Mg2+等。
• 高度改进的活性石蜡去除方法：不需要二甲苯等有毒有机溶剂
• 成本效益：消除了色谱柱，过滤器，费力的重复移液和有机试剂。
• 高通量：与许多不同的自动化液体处理系统兼容。
